人原发性肺腺癌转移相关分子的定量蛋白质组学研究.pdfVIP

蘩瓣一黧一瓣黼黼麟一 Pl iti!嚣器‰一 Ⅵn珊。pibb．ac．Clq 人原发性肺腺癌转移相关分子的 定量蛋白质组学研究木 刘迎福1，2’ 肖志强1’ 张鹏飞1’ 李茂玉1’ 李 萃1) 彭 芳1’余艳辉2’ 易 红1’ 陈主初1，2’” (n中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室，长沙410008；≈中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，跃沙410078) 摘要癌细胞转移是入原发性肺腺癌(1ung adenocarcinoma，AdC)死亡率高和预后差的主要原因．为了筛选潜在的肺腺癌转移 相关分子标志物，依据临床诊断选取无转移的肺腺癌组织和有转移的肺腺癌组织作为研究对象，首先采用激光捕获显微切割 技术(1aser capture microdissection，LCM)对两组肺腺癌组织中的癌细胞进行纯化，再利用荧光差异凝胶电泳技术 (two—dimensional differential in—gel electrophoresis，2D—DIGE)分离无转移肺腺癌组和有转移肺腺癌组的癌细胞总蛋白，通过 Decyder软件分析两组差异表达的蛋白质点，质谱(mass spectrometry，MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定，Westem blot验证 部分差异蛋白annexin A1，annexin A2，annexin A3，B23和S100A9的表达．建立了LCM纯化的无转移和有转移的肺腺 癌组织癌细胞的2D．DIGE图谱，质谱鉴定了20个非冗余差异蛋白质，其中12个蛋白质在有转移肺腺癌组中较无转移肺腺 癌组表达上调，8个蛋白质在有转移肺腺癌组中表达下调．Western blot验证分析显示，差异蛋白annexin A1，annexin A2， annexin A3和S100A9的表达水平在有转移肺腺癌中较无转移肺腺癌增高，B23的表达水平在有转移肺腺癌中较无转移肺腺 癌降低．免疫组化进一步证实S100A9在有转移的肺腺癌中较无转移的肺腺癌中表达上调．首次应用LCM技术联合 2D—DIGE及MS技术分析鉴定出肺腺癌转移相关蛋白质，为研究肺腺癌的转移分子机制、筛选预测肺腺癌转移的分子标志物 奠定了基础． 关键词肺腺癌，转移，蛋自质组，激光捕获显微切割技术，荧光差异凝胶电泳技术 学科分类号R734．2，Q51 DOI：10．3724／SP．J．1206．2008．00586 肺癌是发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一， 严重威胁着人类的健康．肺腺癌是肺癌常见的组织 学类型之一．近几年，肺腺癌的发病率有明显上升 趋势，并且其生存率非常低，预后很差[¨．肺腺癌 发病比较隐匿，转移早，病人常常以转移病灶为首 发症状．肺腺癌的转移是造成生存率低预后差的主 要原因．因此，提高肺腺癌转移的诊断和治疗是降 低其死亡率的主要手段． 肿瘤转移是一极其复杂的过程，涉及癌细胞的 增殖和迁移，基质膜的降解，癌细胞的侵袭和黏 附，以及肿瘤血管形成[21．众多的转移相关分子参 与肿瘤转移过程，并在转移过程中起着极其关键的 调控作用． 现有研究报道， cathepsin B[31， caveolin一1[41，CRMP一1[51，CTGF[6]和contactin一1[71等 许多基因在促进或抑制肺腺癌细胞系的侵袭和转移 过程中发挥着极其重要的作用．还有许多学者用基 因芯片技术分析了肺腺癌的分化和预后，检测出了 一些肺腺癌分化和预后的相关基因[8～101．然而，在 生命活动中，真正执行生物学功能的是蛋白质，且 基因表达的mRNA和蛋白质存在着不一致性．因 此，探讨病理过程中蛋白质分子的改变更为直接可 行，意义重大．随着蛋白质组学时代的到来，蛋白 质组学技术在肿瘤的研究领域得到了广泛的应用． 应用蛋白质组学技术可以从整体的角度来分析肿瘤 转移过程中的蛋白质分子改变，可以筛选出一些能 用于预测肿瘤转移的分子标志物，并且对阐明肿瘤 +国家重点基础研究发展规划项目(973)(200lcB5120)，教育部跨世 纪优秀人才培养计划基金(教计函[2002148)j}tl湖南省科技厅重火科 技专项(04XKl001，05SKl004一1)． 一通讯联系人 Tel：0731-2355116，Fax：0731-4327321，E—mail：tcbl@xysmnet 收稿日期：2008．08—22，接受日期：2008—10一13 万方数据 2009；36(4) 刘迎福等：人原发性肺腺癌转移相关分子的定量蛋白质组学研究 ·449· 转移的分子机制提供理论基础．很多研究者利用蛋 白质组学技术分析了肝癌，胃癌，胰腺癌，前列腺 癌等许多恶性肿瘤的侵袭转移过程中的分子改变， 得到了一些具有重要意义的信息，为揭示这些恶性 肿瘤的侵袭转移的分子机制提供了有利的线索．蛋 白质组学技