高中生物 61 蛋白质的提取和分离课件 中图版选修1.ppt

课堂互动探究 热点考向示例 随堂达标检测 第一节 蛋白质的提取和分离 课程标准 1．尝试蛋白质的提取和分离。 2．以动物血清为材料，提取其中的乳糖脱氢酶并分离其 同工酶。 课标解读 1．简述蛋白质提取和分离的基本方法和基本原理。 2．尝试血清蛋白等的提取和电泳分离。 将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到_________、甚至是________的蛋白质。目前常用的蛋白质分离提纯技术，包括_____技术、_____技术和_____技术等。其中，_____技术最为快捷灵敏、简便易行。 提取和分离蛋白质的方法原理 1．提取和分离蛋白质的方法 高纯度的 单一种类 离心 层析 电泳 电泳 (1)概念 蛋白质含有游离的_____和_____ ，是_____电解质，在一定___条件下带有电荷，在电场中可以向与其自身所带电荷_____的电极方向移动，这就是电泳现象。 (2)原理 蛋白质所带的电荷数_____ ，移动_____ ；电荷数相同时，相对分子质量_____ ，移动_____ 。 (3)结果 不同蛋白质的混合溶液，经___________电泳后，会在_____上形成不同的_____ 。 2．电泳技术 氨基 羧基 两性 pH 相反 越多 越快 越小 越快 同一个电场 凝胶 带纹 洗脱法分离蛋白质利用的原理是什么？它与电泳技术的原理有何不同？ 提示　洗脱法是依据蛋白质分子质量大小，利用凝胶色谱柱使大分子蛋白质优先洗脱出来，而小分子蛋白质后分离出来，称为凝胶色谱法。而电泳法技术则是依据各种分子带电性质的差异，以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现在电场中将各种分子分离。 [思维激活1] (1)蛋白质的性质 蛋白质含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定pH条件下带有电荷。 (2)电泳现象 作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动，这就是电泳现象。 (3)电泳原理 蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，相对分子质量越小，则移动越快。 1．电泳技术分离蛋白质的原理 (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶为载体的一种区带电泳。该凝胶由丙烯酰胺(Acr)和交联剂N，N′—甲基双丙烯聚酰胺(Bis)聚合而成。Acr和Bis单独存在或混合在一起时是稳定的，且具有神经毒性，操作时应戴手套，避免接触皮肤，但在具有自由基团体系时就能聚合。引发自由基团的方法有化学法和光化学法两种。采用不同浓度的Acr、Bis、Ap、TEMED使之聚合，产生不同孔径的凝胶。因此，可按分离物质的大小、形状来选择凝胶浓度。 (2)电泳结果 2．聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果及其鉴定 不同的蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹。每一种带纹可能就是一种蛋白质。 (3)结果鉴定 将带纹一个一个地剪下来，分别予以洗脱，然后对洗脱液中蛋白质做进一步的分离。如果不能再分离，则这个带纹中很可能含有一种单纯蛋白质；如果还能再分离，则这个带纹中含有多种蛋白质，需要作进一步分离，直至提纯。 电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷________方向的电极移动 (　　)。 A．相同 B．相反 C．相对 D．相向 解析　在一定pH作用下，生物大分子中有某些可解离的基团，这些基团会带上正电荷或负电荷，在电场作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 答案　B 【巩固1】 (1)点样：样品的成分包括_________5 μL、与质量浓度为0.4 g/mL的_____溶液及质量分数为0.1%的_______指示剂_______混匀后，用___________吸取样品加到电泳样品槽的_____上。 (2)电泳：打开电源，将电流调节至___mA，待样品进入分离胶后，改为________mA。当溴酚蓝前沿距离硅胶框下缘_____时，将电流调回零，关闭电源。 提取和分离蛋白质的过程 1．血清蛋白的提取和分离 新制血清 蔗糖 溴酚蓝 等体积 微量加样器 胶面 10 20～30 1 cm (3)染色：将凝胶放入质量分数为______________________染色液中染色___min。 (4)脱色：用体积分数为__________溶液浸泡漂洗数次，每隔 _____h更换一次脱色液。 (5)制干胶板：可获得血清蛋白的__________ 。 (1)加拿大科学家班廷等人发现和提纯了_______，救助了数千万的糖尿病患者。 (2)在癌变检测中，现在只需从早期患者的_____、 _____或 ___________中提取少量蛋白质样品，采用_______________技 术，就可以更加快速