基因工程第三组——核算的提取.pptVIP

DNA纯化要求 核酸样品中不存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子； 其它生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降到最低程度； 排除其它核酸分子的污染，如提取DNA分子时应去除RNA，反之亦然. 基因组DNA－ CTAB法 TrisHC（pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg 2+ 或Mn 2+ 离子抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境使DNP充分溶解，存在于液相中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； β巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除 DNA提取基本步骤 RNA提取及常见问题分析 RNA提取及常见问题分析 RNA提取相关知识 RNA提取方法及注意事项 RNA提取常见问题分析 细胞中RNA的含量 107?个细胞 10μg 30mg动物组织 30-100mg植物组织 rRNA?占80-85% mRNA占1-5%? mRNA的应用 RT-PCR,?Northern杂交,cDNA文库构建 mRNA末端快速扩增(RACE),差异表达(DDRT-?PCR),引物延伸反应,体外转录RNA标记,RNA?酶保护试验,RNA微注射(RNA?Microinjection) R