水处理微生物学细菌的生长和遗传变异.docVIP

第三章 细菌的生长和遗传变异 第一节 细菌的生长及其特性 细菌吸收营养物质以后，在酶的催化下进行各种新陈代射反应，如果同化作用大于异化作用，则细胞质的量不断增加，表现在细胞自身就是体积或重量的不断增加。这种现象叫生长。生长到一定阶段，细菌以二分裂的方式形成两个子细胞，这就是繁殖，其持征是细菌个体数增加。细菌的生长繁殖很快，适宜的环境下每隔20～30 min分裂一次。 细菌有没有年轻、年老之分呢？回答是肯定的，但是细菌的所谓菌龄和人的老年、中年、幼年的概念不同。人是按出生之时算起，年纪越小越年轻，越大就越老。细菌则不然，细菌是以分裂法进行繁殖的，一般繁殖一代的时间，只要20～30min，而且在一大群细菌中也无法区分每个细菌的年老年轻。因此细菌的所谓年龄是指一群细菌在一定的环境条件下生长而表现出来的待征。换句话说，描述细菌的生长往往用群体繁殖和生长所表现出来的特征来代表。在介绍细菌的生长特性之前，先介绍细菌的生长测定方法。 一、细菌生长测定方法 (一)直接测定 直接测定是常用的细菌生长测定方法，其特点是测定过程快速，但不能区分细菌的死活。根据不同的测定方法原理，可以分成以下几类： 1、显微镜直接计数法 显微镜直接计数法又称全数法。它又分成下述几种： (1) 涂片染色法 将已知体积的待测样品，均匀地涂布在载破片的已知面积内，经固定染色后计数菌数。一般藉助目测微尺的直径标准来计算细菌的数量。 (2) 计数器测定法 采用特殊的细菌或血球计数器进行测定。操作过程是取一定体积的待测细菌样品放于计数器的测定小室与载玻片之间，由于测定小室的体积是已知的，因此根据得到的计数值就可以计算出细菌含量。 (3) 比例计数法 将待测样品溶液与等体积的血液混合，然后涂片，在显微镜下测定细菌与红血球数的比例，因血液中的红血球数已知(男性400～500万个／mL，女性350～450万个／mL)，由此可以测得细菌数量。 2、比浊计数法 这是测定悬浮细胞的快速方法。其原理是细菌细胞是不透光的，光束通过悬浮液时会引起光的散射或吸收，降低透光度，在一定范围内透光度与溶液的混浊度即细胞浓度成正比，籍此可以测定细菌浓度。采用这种方法时，为了得到实际的细胞绝对含量，通常须将已知细胞浓度的样品按上述测定程序制成标准曲线，然后根据透光度或光密度值从标准曲线中直接查得细菌含量。 (二)间接计数法 间接计数法又称活菌计数法。它是通过测定样品中活的细菌数量来间接地表示细菌的含量。因此，这种方法不含死的细菌细胞，而且测定所需的时间也较长。它分下述几种方法： 1、平板计数法 将待测细菌样品先作10倍梯度稀释，然后取相应稀释度的样品涂布到平板中，或与未经融化的固体培养基混合、摇匀，培养一定时间后观察并计数生长的细菌数，最终根据细菌数和取样量计算出细菌浓度。一般计数平板的细菌生长菌落数以30～300个为宜。菌落数太多，计数时费时费力；菌落数太少，则计数结果误差太大。平板计数法是采用最广的一种活菌计数法。 2、液体计数法 液体计数法是根据统计学原理设计的一种方法。具体做法是；先将待测细菌样品作10倍梯度稀释，然后取相应稀释度的样品分别接钟到3管或5管—组的数组液体培养基中，培养一定时间后．观察各管及各组中细菌是否生长，记录结果，再查已专门处理好的最可能数(most probable number，MPN)表，得出细菌的最终含量。因此，这种方法又叫最可能数法或MPN法。 3、薄膜计数法 对于某些细菌含量较低的测定样品(如空气或饮用水)，可采用薄膜计数法。将待测样品通过带有许多小孔但又不让细菌流出的微孔滤膜，藉助膜的作用将细菌截留和浓缩，再将膜放于固体培养基表面培养，然后类似于板计数那样计算结果。这种方法的要求是样品中不得含有过多的悬浮性固体或小颗粒。 上述各种活菌计数法中，除了已所述的特点以外，还有一个共同的要求，即测定的样品中细菌必须呈均匀分散的悬浮状态。对于本身为絮体或颗粒状的细菌样品，如好氧生物处理中的活性污泥，在测定计数之前要采取预处理方法(如匀浆器捣碎等)进行强化分散。 (三)重量法 细菌细胞尽管很微小，但是仍然具有一定的体积和重量，因此藉助群体生长后的细胞重量，可以采用测定重量的方法直接来表示细菌生长的多少或快慢。 1、测定细胞干重 可采用离心法或过滤法测定。取经过培养一段时间的待测细菌样品，用离心机收集生长后的细菌细胞，或用滤纸、滤膜过滤截取生长后的细菌细胞，然后在105～110℃下进行干燥，称取干燥后的重量，以此代表细菌生长量的多少。一船．从细菌细胞的化学组分可知，干重约为湿重的10％～20％。原核细菌的细胞重量是10－15～10－11g／细胞，真核单细胞微生物重量为10－11～10－7g／细胞。 水处理中构筑物内细菌生长量通常采用这种