第六章 胚胎工程解析.pptVIP

着床定义 胚泡逐渐埋入子宫内膜 的过程 着床时间 受精后6-7天开始， 11-12天完成 着床部位 子宫体、子宫底 1.供体、受体的选择 2.超数排卵 3 同步发情 4.人工受精 5.胚胎采集 6.胚胎的检查与鉴定 7.胚胎移植 胚胎移植的技术程序 1.供体和受体的选择 畜牧学选择：胚胎移植的供体一般是需要加速繁殖的生产能力较高的优良品种，供体应具有相当高的育种价值,供体生殖机能应处于较高的状态：产后60天以上，无生殖系统疾病，体质强健；受体则是繁殖性能较高的本地品种，对地方适应性强，体型中上等，非优良品种。 兽医学选择：主要任务是排除病毒，尤其是要把那些生殖器官患有疾病的个体清理出去。 生理学选择：重点是检查超排和同期发情处理前的卵巢活性，即卵泡发育和黄体功能。 2. 超数排卵处理 利用促性腺激素处理，使得卵巢中有更多的卵泡发育，更多的卵被排出，这个过程就称为超数排卵（superovulation） 意义：让每个供体提供更多的胚胎 3.受体同期发情处理 1)前列腺素处理法：有溶黄体作用 产品：氯前列烯醇ClO、氨基丁三醇前列腺素F2α 、美国普强公司的律胎素、英特威公司的保顺产 用法： 肌肉注射：容易操作，用药量较大 子宫内注射：将激素注入到母畜子宫内或阴道穹窿内，用量约为肌注的半 阴道粘膜注射：从阴道内壁刺入0.5cm左右，注入激素。用量约为肌注的半 2）孕激素处理法：对母畜施以孕酮激素类药物，在血液中保持一定量，造成人为黄体期，使卵巢内卵泡的发育和成熟受到抑制。给药的方法可以是阴道海绵栓塞、注射、口服、皮下埋植等。 阴道栓法：可靠，但成本较高 口服法：方法简单，用量不可靠 注射法：量准确，但非常麻烦 埋植法：较少应用 3）促性腺释放激素和促性腺激素类 促性腺释放激素类：LHRH—A3等 促性腺激素类：PMSG（eCG)、FSH，LH、HCG（hCG） 用法：一般为肌肉注射，HCG、LHRH、LH均可在发情时静脉注射 CIDR和放栓枪 放栓 羊同期发情——放栓 PG是一类有生理活性的不饱和脂肪酸，不仅可引起子宫强烈收缩，而且还有溶解黄体的作用，黄体退化前，卵泡的发育被抑制，因此，PG可通过促进黄体消退而引起下一轮卵泡的发育和排卵。 b.超数排卵的方法： 各类激素搭配使用，FSH在动物体内的半衰期比较短，必须每日注射1到2次，连续应用5天，以后用PMSG，在发情周期的卵泡期皮下或肌肉注射一次即可。 FSH+其它激素：采用小剂量多次注射的方法，每天注射2次，连续注射3到4次。 PMSG+其它激素：由于PMSG的生物半衰期较长，因而只需注射一次。 c.影响超数排卵的因素有： 供体的年龄例如产奶年龄在3-8岁，超排效果好，超过10岁，超排的卵明显下降。 供体品种差异 激素处理的剂量：一般说来，激素剂量越大。排卵越多，但同样也要看到，过剂量的激素反应可能抑制排卵，或者影响卵的质量。 营养、季节、地域、药物质量等。 2）从活体卵巢中采集卵母细胞：借助超声波探测仪、内镜或腹腔镜直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞。 3）从屠宰后母畜卵巢上采集卵母细胞：直接摘出卵巢，放入30-37度灭菌生理盐水中，快速运送到实验室。 （2）卵母细胞的选择：一般只培养A级和B级卵母细胞。 （3）卵母细胞的成熟培养： 在成熟培养基里添加胎牛血清、促性腺激素、雌激素和抗生素成分。COC经成熟培养后,卵丘细胞层扩散,靠近卵母细胞周围的卵丘细胞呈放射状排列,出现放射冠,通过染色体分析,卵母细胞处于第二次减数分裂中期. 2、精子的获能处理 精子的获能过程包括两个阶段：第一阶段是脱出精子表面的抗原物质和去能因子，增强了膜通透性。第二阶段是精子细胞膜蛋白变化，即发生顶体反应。 精子的获能方法有两种，即体外获能和体外获能。 体内获能：从交配母畜的子宫内取精子用于受精。 体外获能：分为两步：一是精子的洗涤；二是精子的获能处理。 洗涤: 在选择精子时可用上浮分离法，即在精液上面加入少量培养液，有活力的精子会游到培养液上部。收集培养液上部的精子，即可得到有活力的精子，这种方法叫做上浮法。 获能: 1）钙离子在精子获能时起关键作用，诱发顶体反应。 2）氨基多糖（GAG）来诱导精子获能，肝素是高度硫酸化的GAG，咖啡因能增强肝素的诱导作用。 3）在精子获能过程中，BSA可以降低精子顶体膜中胆固醇的浓度，有利于顶体反应。精子获能后，BSA可促进迅速穿透卵子。 3、体外受精 主要包括三种： 1.常规体外受精技术 2.与分离精子相结合的体外受精技术 3.显微受精技术 4、