WatersAllianceHPLC系统操作规程.doc

HPLC标准操作作业指导书 一、准备： 流动相：按方法要求配制流动相，经0.45?m微孔滤膜过滤，纯流动相超声波脱气10分钟以上。 样品溶液：按方法要求配制样品溶液，并以过滤或高速离心方式除去溶液中的固体微粒。 二：开机及平衡系统： 打开主机和检测器电源，待仪器界面出现Idle提示时，则表示仪器自检完成； 1.将2695泵清洗管路“Seal Wash in”（不透明管）和洗针管路（绿管）分别放入适当的溶剂中，按2695面板Diag键，进行以下操作： 1.1 管路排气操作：选择Prime SealWash，按Start键开始清洗，打开泵箱，检查泵入口处管路无气泡，则按Halt键暂停，按Close键回到上一界面。 1.2 洗针液管路排气操作：选择Prime NdlWash，按Start键，系统自动操作排气程序，自动完成操作后按Close键返回。按Exit键返回自检界面。 2.干燥管路的冲洗 （长期不使用仪器时3-5天须做此项） 按屏幕右方Menu/Status键进入操作界面，按Direct Function键进入子菜单，选择Dry Prime项，逆时针打开两泵之间的黑色旋钮，插入注射器，点击OK键，选择Open A键，用注射器抽出约1ML液体，再同法操作B、C、D三条管路，完成后按Continue键，仪器自动进行排液，排液结束后拧紧黑色旋钮。 3.系统排气、换液 按Direct Function键进入子菜单，按光标选择Wet Prime项，按OK键，设定流速和时间后按OK键完成排气操作。 4.注射器排气（注射器内无气泡时不需操作此项，但更换流动相时必须操作此项） 按Direct Function键进入子菜单，按光标选择Purge Injector项，按两次OK键，系统自动完成后屏幕上方显示Idle，保持Menu/Status界面。 以上4项为仪器硬件操作设定程序，在仪器分析样品前必须先操作以上步骤。 备注： 1. 洗针液配制：用实验中的有机相与水按实验中流动相的比例配置，水相比例可以略高一点，水相中不能含有盐类。 2. 清洗泵杆溶液：一般采用10%甲醇溶液，溶液有效期为15天左右。 三、HPLC 工作站的操作 1. 进入工作站以及创建文件夹 双击电脑上工作站图标，输入User Name“***” ,Password“***”，按OK键确认，在下一界面上选择实验相应文件夹进入工作站界面（若还未创建相应文件夹，则在界面上选择任一文件夹后进入工作站界面，在主菜单一栏点击Manage项，在下拉菜单中选择Create New Project进入创建程序，点击Next键，在跳出窗口的Table Space一项设为200，设定完后点击Next键直至设置Project Name界面，填入需创建的文件夹名称，按Finish键完成。） 2.切换文件夹 在主菜单栏点击Manage项，在下拉菜单中点击Change Project/System…一栏，在弹出对话框中选择目标文件夹，点击OK键进入相应操作界面。 3.建立实验方法 在左侧命令栏中点击控制面板Control Panel按钮，在切换的界面左下方找到Lamp状态指示一栏，检查其对应小灯是否显示为绿色。若为绿色则表示检测器正常运行，点击命令栏中样品队列Sample Queue按钮返回原来的操作界面即可；若显示为黑色，则在此框中鼠标单击右键，在弹出菜单中选择Reset TUV进行校正；若在右击后小灯未恢复绿色或在检查时小灯为红色，则需要关闭检测器电源重启进行校正。检查正常后点击Sample Queue返回原来的操作界面。 监视区单击方法组编辑向导Invoke Method Set Editor Wizard按钮，在弹出对话框界面上选择Create New按钮进入编辑界面。 单击主机图标弹出2695编辑界面，点击Flow一栏，点击泵模式下拉菜单，根据实验要求选择等度或梯度模式，再设置相应的流动相参数（流速、比例）。在Temperature一栏中设置相应的温度，Solvents一栏可标注流动相的名称。 完成主机设置后点击2489检测器图标切换到检测器编辑界面，根据实验要求选择检测要求选择波长模式（single：单波长检测；Dual:双波长检测），在Wavelength一栏设定实验检测波长， Sampling Rale 的参数一般设定为2 Points/Sec. 参数设置完成后在该界面主菜单栏点击File选项，在下拉菜单中选择Save as ...项，在弹出对话框中键入相应的名称，点击Save按钮保存方法，完成后退出该界面。在编辑界面点击Next进入下一步，再点击Next进入下一界面，点击Finish完成实验方法的创建和保存。 4.放置样品及设置序列 样品放置在转盘中，转盘有从A-E编码