第二章++DNA结构分解.ppt

复习题 1、名词解释 反向重复序列 DNA链的呼吸作用 Cot曲线 DNA变性 DNA的熔解温度 DNA复性 2、简答题 ＊ DNA是否唯一的遗传物质？ ＊ 如何确定DNA一级结构的方向性？ ＊ 决定DNA双螺旋结构状态的因素如何？ ＊ B-DNA中出现的大沟、小沟有何差别？ ＊ DNA结构多态性及其产生的原因。 ＊ 室温中蒸馏水中的DNA变化如何？为什么？ ＊ Ⅰ、Ⅱ型拓扑异构酶的作用方式和结果的情况 * * PCR * 低温减少了互补链碰撞的机会，而且容易形成链内的二级结构，且错配的片段解开寻找正确的互补链也很困难 1、 影响 Tm值的因素 （1） 在 A, T, C, G 随机分布的情况下 ，决定于GC含量 （2）GC%含量相同的情况下 GC%愈高 → Tm值愈大 GC%愈低 → Tm 值愈小 AT形成变性核心，变性加快，Tm 值小 碱基排列对Tm值具有明显影响 5` GC 3` CG n ＞＞ 5` CG 3` GC n 5` TA 3` AT n ＜＜ 5` AT 3` TA n 36.7 ℃ 57.02 ℃ Tm 136.12 ℃ 72.55 ℃ ※ 嘌呤嘧啶的排列顺序对双螺旋结构（稳定性）的影响 即－－氢键数目相同，但相邻碱基的堆积力不同 从嘌呤到嘧啶方向的碱基堆积力作用显著地大于 同样组成的嘧啶到嘌呤方向的碱基堆积作用 5’ AC 3’ 3’ TG 5’ 5’ CA 3’ 3’ GT 5’ Purine-Pyrimidine Steps Have Extensive Base Stacking 5’ 3’ 3’ C A T G 5’ 5’ AC 3’ 3’ TG 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ C G A T 5’ CA 3’ 3’ GT 5’ Pyrimidine-Purine Steps Have Little Base Stacking ? 生物体内仅UAA为最有效的终止密码子 因为： UAA AUU 的Tm值是最低的一个，即使生 理温度下也不稳定 （3） 大片段D.S DNA分子之间比较 片段长短对Tm值的影响较小, 与组成和排列相关 （4） 小于100bp 的 D.S DNA分子比较 片段愈短， 变性愈快，Tm值愈小 （5） 变性液中含有尿素，甲酰胺等 尿素，甲酰胺与碱基间形成氢键 改变碱基对间的氢键 Tm 值可降至40℃左右 （6） 盐浓度的影响 每升0.18mol Na+是常用的标准条件 思考题：室温下蒸馏水中的DNA会如何？ pH ~ 12 酮基 → 烯醇基 pH ~ 2-3 NH2 → NH2+ (质子化) 改变氢键的形成与结合力 （7） 极端pH条件的影响 一切减弱氢键， 碱基堆积力的因素 均将使Tm 值降低 2、 常用的变性方法 ☆ 热变性 ☆ 碱变性 应用广泛，特别是用于变性动力学研究 缺点：高温引起磷酸二酯键的断裂，得到长短不一的单链 pH11.3时，全部氢键被淘汰 无热变性的缺点，为制备单链DNA的首选方法 ◎ 保存单链DNA的条件 保持pH大于11.3