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博 士 学 位 论 文 草乌中二萜生物碱的制备及中药指纹图谱研究 Studies on Diterpenoid Alkaloids of Roots of Aconitum Kusnezoffii Reichb. and Fingerprint of Traditional Chinese Medicine 作 者 姓 名： 徐宁 学科、 专业： 精细化工 学 号： 106070101 指 导 教 师： 赵德丰教授 张 华教授 完 成 日 期： 2012 大连理工大学 Dalian University of Technology  大连理工大学学位论文独创性声明 作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。 若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。 学位论文题目： 作 者 签 名 ： 日期： 年 月 日 摘 要 65种乌头属植物是重要的中药资源，二萜生物碱是其主要的活性化合物，具有镇痛、抗炎和抗心律失常等作用，但只有十几种植物进行了初步研究。本文以草乌中乌头碱为模式物，首次提出了吸附树脂-高效制备液相色谱法快速纯化二萜生物碱的工艺，并建立了二萜生物碱植物的质量控制标准。 在二萜生物碱的提取过程中，考察了提取方法、提取溶剂和提取时间等因素，建立了总二萜生物碱和乌头碱的提取工艺；在二萜生物碱的富集过程中，通过对树脂、上样及洗脱等因素研究，筛选出适合于二萜生物碱分离XAD4树脂，优化工艺条件。与传统方法相比，吸附树脂法具有操作简单、效率高等优点，适合大规模二萜生物碱的富集。本文解决生物碱在色谱柱上易形成拖尾现象，实现高效液相色谱法分离纯化二萜生物碱。值得注意的是，该方法在流动相为酸性且不加盐条件下一步达到目的。通过实验证明，采用色谱柱C18CHE，流动相乙腈-甲酸水溶液梯度洗脱一步分离乌头碱，纯度为99.9%。在此基础上，结合传统分离方法，从草乌中提取2个新二萜生物碱化合物。 当植物药的有效成分不明确时，可采用指纹图谱衡量药品的质量。本文通过HPLC- ESI-MS技术和1H NMR技术建立了适合于乌头属植物的指纹图谱，较好同时对二萜生物碱和其它组分进行检测，有效增加指纹图谱的信息量。首次以二萜生物碱为主要检测化合物构建了HPLC-MS中药指纹图谱，通过紫外吸收检测器和离子检测检测器之间优势互补，准确反映样品的质量；相似度分析对不同来源的样品进行量化比较；差异性分析和聚类分析直观显示样品的相似程度和差异的来源。同时，本文采用大孔吸附树脂技术获得中药总特征提取物(GCE)构建一种新的1H NMR中药指纹图谱方法，较好表达活性成分的分布情况，提高了指纹图谱的重复性和稳定性；结合主成分分析评价不同来源的样品。通过实验证明，该方法可区分不同来源、同科同属或易混淆的药材，对中药的质量控制方法具有普遍性和通用性。 关键词：二萜生物碱；HPLC-MS；1H NMR；中药指纹图谱；大孔吸附树脂；高效制备液相色谱 Studies on Diterpenoid Alkaloids of Roots of Aconitum Kusnezoffii Reichb. and Fingerprint of Traditional Chinese Medicine Abstract Contents of the abstract. Times New Roman. Key Words：Write Criterion; Typeset Format; Ph. D Dissertation 目 录 摘 要 I Abstract II CONTENTS V 图表目录 VII 主要符号表 VIII 1 绪 论 1 1.1 引言 1 1.2 二萜生物碱概况 2 1.2.1 二萜生物碱的分布规律 2 1.2.2 二萜生物碱的结构域分类 2 1.2.3 二萜生物碱活性的研究进展 6 1.2.1 二萜生物碱的提取方法和分离纯化 8 1.3 中药指纹图谱 10 1.3.1 中药指纹图谱的