目的基因的制备知识.ppt

第五章 目的基因的制备 第一节 目的基因的制备 第二节 目的基因的分离 一 概 述 基因工程或DNA重组技术三大用途的前提条件是从生物体基因组中分离克隆目的基因。 二 什么是目的基因 基因工程的主要目的是使优良性状相关的基因聚集在同一生物体中，创造出具有高度应用价值的新物种。为此必须从现有生物群体中，根据需要分离出此类基因，即准备要分离、改造、扩增或表达的基因通常称之为目的基因。 如抗逆性相关基因（抗病、抗寒等）、生物药和保健品相关基因、毒物降解相关基因 、工业用酶等相关基因等。 一般来说，目的基因的制备战略分为两大类 一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库，即将某生物体的全基因组分段克隆，然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆； 另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆表达。 第一节 目的基因的制备 1、直接法制备基因 2、从基因组文库中钓取目的基因 3、从cDNA文库中钓取目的基因 4、通过PCR直接扩增出目的基因 1.1 限制性核酸内切酶酶切分离法 限制性内切酶酶切分离法适于从简单基因组（如质粒和病毒）中分离目的基因。 ①对已定序的DNA分子，只需用已知识别序列的限制性核酸内切酶进行一次或几次切割，分离纯化所需DNA片段，与适当载体重组后转化受体菌后即可得到目的基因的克隆。 ②对已知定位的目的基因，只要根据