假根羽藻Cyt.PDFVIP

第38卷 第 1期 2 0 0 7 年 1月 海 洋 与 湖 沼 OCEANOLCIGIA ET LIMNOLOGIA SINICA Vo1．38．No．1 Jan．，2 0 0 7 假根羽藻 Cyt b6f蛋白复合体的分离与纯化木 李宾兴 毛大璋 高振泮 李良璧 ① 匡廷云 ① (1．中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室 北京 100093； 2．中国科学 院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室 青 岛 266071) 提要 改进 了以往分离纯化 Cyt b6f的方法，进行 了海洋绿藻—— 假根羽藻(Bryopsis corticu— lans)Cyt b6f蛋白复合体分离纯的研究。结果表明，该 Cyt b6f制剂由Cytf、Cyt b Rieske[Fe— S]蛋白和亚基 IV四种主要的多肽亚基以及少量的Ch1．a和类胡萝 卜素组成。4个多肽亚基 的表观分子量分别为34．8、24．0、18．7及 16．7kD，该 Cyt b6f制剂 的 Cyt b6／f比值接近 2．0，其 纯度值为 9．9nmol Cytf／mg，其催化 电子传递 的活性(C 。一PQH：一PC)为 73e／s。上述分析表 明，假根羽藻 Cyt b6f在组成、纯度和催化活性方面均与已报道的高等植物、淡水绿藻和光合细 菌的 Cyt b6f制剂相似。 关键词 海洋绿藻，假根羽藻，Cyt b6f，分 离，纯化 中图分类号 Q5 细胞色素 6 蛋白复合体(Cyt b6f)作为质 体醌一质体蓝素氧化还原酶，在光合作用的电子传 递及能量转化 过程 中扮 演着重要 的角色 。它一 方面介导光系统 II(PSII)和光系统 I(PSI)之间的 线性电子传递和围绕 PSI的循环电子传递，另一 方面利用电子传递 过程 中释放出来 的 自由能将 质子从类囊体膜的外侧跨膜传递到类囊体膜 的 内侧 ，形成跨膜 的质子电化学梯度 ，为 ATP的合 成提供能量(Cramer et al，1987；Hope，1993)。此 外 ，它还 可以通过调控 LHCI激酶 的磷 酸化 ，在 调节 PSII和 PSI之间激发能分配 中起作用 (An— derson，1992)。 每个 Cyt b6f单体分子由4个大亚基(33／34— 17kD)：含有一个c一型血红素的Cytf，含有两个 b一 型血红素的 Cyt b ，Rieske[Fe—S]蛋白(含有一个 2Fe-2S原子簇)与亚基 IV和 4个小于 5kD的小 亚基组成 。四个大亚基 中，前三个亚基 的色基均 为氧化还原中心 ，而亚基 IV则被视为 PQ的结合 蛋 白(Li et al，1991)。另外，它还含有约 1分子的 叶绿素 a和 1分子或低于 1分子的类胡萝 卜素。 自 Hurt等 (1981)首 次分离纯化 出有活性的 Cyt b6f以来，人们已从许多不同来源的植物中分 离纯化出了Cyt b6f制剂，例如，高等植物中的菠 菜和豌豆(Huang et al，1994；Philips et al，1983)， 淡水绿藻中的莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardti) 和斜生栅列藻(Scenedesmus obliquus)(Wynn et al， 1988)，以及蓝 细 菌 中 的钝 顶螺 旋 藻 (Spirulina platensis)、项 圈藻 (Anabaena variabilis)和集胞藻 (Synechocystis PCC6803)(Hauska，2003) 。迄今 为止，尚未见到有关海洋绿藻 Cyt b6f的报道。假 根羽藻 (Bryopsis corticula)是管藻 目的多核单 细 胞海生绿藻，它生长在潮 间带 ，细胞壁较薄 ，含有 较多藻胶 ，在我 国东南沿海 分布较广 ，是一种分 离、纯化类囊体膜蛋白复合体的比较理想的实验 材料。因此 ，本研究中作者改进 了以往分离纯化 Cyt b6f的方法(Yan et al，2001)，成功地从假根羽 藻中分离纯化 出了其类囊体膜 的 Cyt b6f提取物， 并对该提取物的组成和生物活性进行了鉴定。 }国家自然科学基金资助项 目和。李宾兴，博士研究生，E—mail：lbinxing@yahoo．com ① 通讯作者，E—mail：lbli@ns．ibcas．ac．ca．kuangty@public．bta．net．ca 1)Hauska G，2003．The isolation of functional cytochrome b6f complex：from lucky encounter to rewarding experiences From：WWW．biologic．uni