非特异性免疫实验1126详解.pptVIP

一、非特异性免疫 吞噬作用 示教 溶菌酶实验 1个平板/组 补体传统途径激活实验——溶血实验 1份/组 二、机体细胞免疫功能测定 1、E玫瑰花环实验 示教 2、淋巴母细胞转化实验 示教 一、吞噬细胞及吞噬作用 吞噬作用是指白细胞游出到炎症灶，吞噬病原体以及组织碎片的过程。 完成此功能的吞噬细胞主要有两种，其吞噬异物的过程基本相同，但其结构和化学成分则有所不同。 中性粒细胞 巨噬细胞 实验方法：中性粒细胞的吞噬作用 金黄色葡萄球菌1-2ml，注入小白鼠腹腔内 5小时后，解剖，腹腔液涂片，染色 观察小吞噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌的现象 实验方法：巨噬细胞的吞噬作用 10%鸡红细胞悬液注入小白鼠腹腔内 分别于1,6,24小时抽取腹腔液涂片，染色 观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象 二、溶菌酶试验 溶菌酶是正常体液与分泌液中所含的一种低分子量的碱性蛋白质，主要来源于巨噬细胞，是天然免疫中一种重要的体液杀菌成分。 肽聚糖是细菌细胞壁中的重要成分，溶菌酶能够水解肽聚糖从而使细菌溶解。 细 革兰氏阳性：溶解 菌 革兰氏阴性：肽聚糖外面有一层脂多糖和脂蛋 白，一般情况下不受溶菌酶的影响。 1、实验室准备： （1） 带菌平板的准备：处理好溶壁微 球菌加入琼脂内,到平板,冷凝备用。 （2）每平板打4个小孔，如图。 2、同学们操作步骤： 清水漱口 将唾液涂于空平板中 用吸管吸出，按下图滴入孔内 37℃过夜 明天上午测量溶菌环的直径，记录分析 三、补体溶血实验 原理：补体经过经典途径激活后产生溶解细胞等作用。 RBC（Ag） + 溶血素（Ab） + 补体 RBC溶解 方法 结果与判断 红细胞溶解，液体变为红色透明（+） 不溶解，液体均匀浑浊或有少量红细胞沉于管底（-） 四、E玫瑰花环形成实验 实验原理 T细胞表面标志CD2，即绵羊红细胞受体 绵羊红细胞表面CD58可与CD2结合 可用于T细胞的计数与分离 五、T淋巴细胞转化实验 T细胞受到特异性抗原或非特异性丝裂原刺激时，可发生转化。 特异性抗原 非特异性丝裂原：PHA、ConA等。 正常人淋巴细胞受到PHA刺激后，其转化率为60-80%。 转化细胞形态特征 细胞体积：增大 细胞核 大小：增大 染色质：疏松 核仁：清晰 有丝分裂：+/- 细胞浆 着色 空泡或伪足 * * 1 2 3 4 4 1 2 3 PBS 阴性对照 鸡蛋清 阳性对照 3，4加入唾液标本 0.75 ---- ---- 0.25 4 0.5 0.25 ---- 0.25 3 0.5 ---- 0.25 0.25 2 0.25 0.25 0.25 0.25 1 结果 生理盐水 补体 溶血素 （Ab） 2%RBC （Ag） 管号 左:（甲紫染色，800×）：可见2个被绵羊红细胞包围而形成玫瑰环的T淋巴细胞； 右:（吖啶橙染色）：图中可见3个染成橙黄色荧光的T淋巴细胞被绵羊红细胞所包围。 T淋巴细胞玫瑰花环 实验结果 凡能结合三个以上绵羊红细胞者为玫瑰花形成阳性细胞。 正常人的花环形成率50-70%，大致可以代表周围血中T细胞的百分数。