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肿瘤标志物及临床应用 早在1845年，英国的Maclntire首先发现了肿瘤标志物，并于1847年由Bence Jones称之为“白蛋白样物质”（Albumin-like substance）。 1889年，Kahler将其分类为“复合骨髓瘤”的一种分解产物。 1929年，Hirszfeld报道在肿瘤组织中发现了胚胎性特殊物质。 1943年，Gross论证了关于肿瘤组织的抗原性。 1952年，Bjorklund将56种肿瘤组织的提取液混合后注入马体内，产生了抗血清，从而进一步发现了肿瘤组织比正常组织具有更强的抗原性。 1957年，他将这些最初广泛应用的肿瘤标志物定义为组织多肽抗原。 Ziler（1958年）在胎儿组织中发现了甲胎蛋白（AFP）。 Goldt和Freedman（1965年）从结肠癌的提取液中发现了癌胚抗原（CEA）。 1975年，Kohler和Milstein用细胞融合法成功地制备了单克隆抗体，这就为研究肿瘤标志物提供了更有意义的手段。 80年代以后，用于肿瘤细胞抗原分析的单克隆抗体（Mab）大量涌现，高敏感的免疫组化技术（IH）应运而生。 生物化学、免疫学及分子生物学等方法的建立加速了肿瘤标志物研究的发展。 三、肿瘤标志物检测的意义 1、确定肿瘤的组织发生 2、异位肿瘤和转移性肿瘤的鉴别 3、辅助识别肿瘤的良恶性，癌前病变与癌 4、对肿瘤细胞增生程度的评价 5、辅助肿瘤分期： 在判断肿瘤是原位还是有浸润发生以及有无血管、淋巴管的侵袭是与肿瘤分期密切相关的。 例如用层粘连蛋白（laminin）和Ⅳ型胶原的单克隆抗体可清楚显示基底膜的主要成分。一旦证实癌细胞突破了基底膜，就不是原位癌，而是浸润癌了，其预后意义是不同的。 1、肿瘤免疫组织化学标记 ? 阳性标记色度特征 肿瘤免疫组织化学标记着色程度取决于抗原含量、分布密度和标记方法及其敏感性。 淡黄色，提示为弱抗原； 棕黄色，提示为中等度抗原； 棕黑色，提示为强抗原。 ? 胞膜型 胞核型 胞质型 微绒毛型 抗原颗粒主要分布于腺癌细胞的微绒毛。 复合型 在常规免疫组化标记中，同一种抗原可以同时表达于胞膜和胞质、胞核和胞质、微绒毛和胞质，但很少发现胞膜和胞核同时表达。 ? 免疫组化结果的判断原则 ①必须设染色对照 ? ②抗原表达必须在特定部位 不在抗原所在部位的阳性表达一概不能视为阳性 ? ③阴性结果不能视为抗原不表达 ? ④对免疫组化标记结果的意义不能绝对化 ? 假阴性结果的原因主要是 ①抗体已失活或浓度不当或抗体本身达不到应有的敏感度； ②由于组织自溶，抗原扩散而导致抗原消失，特别在长期固定的标本中因抗原漏出而致假阴性，因此多用新鲜固定之标本； ③操作步骤不当，如反应时间不够或过久、洗脱不够或温度过高； ④组织或细胞中抗原的含量过低，所用方法难以检测到，如用直接法检测为阴性，但改用间接法时则为阳性。 ? 假阳性结果的主要原因是 ①所用的抗体与其他无关的抗原有交叉反应，特异性差，特别在应用多克隆抗血清时更易出现； ②所用的抗体浓度过高或染色过程中切片干燥导致抗体与组织产生非特异性结合； ③组织或细胞中有内源性过氧化物酶、碱性磷酸酶及生物素等产生非特异性显色； ④组织中含有残存的正常组织，如软组织肿瘤浸润至骨骼肌或神经组织，当用抗myoglobin抗体或抗S-100蛋白抗体时，易误诊为横纹肌肉瘤或来源于神经的肿瘤； ⑤由于肿瘤侵犯正常组织与细胞，导致其胞质内可溶性蛋白质释放于组织间隙中，并为肿瘤细胞非特异性吸收或吞噬。 2、PAP法和APAAP法 过氧化物酶-抗过氧化物酶法（PAP）和碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶法（APAAP）的原理是：应用抗酶抗体与酶结合，形成可溶性的、稳定的酶-抗酶抗体复合物。 3、ABC法 将亲合素（A）与生物素（B）标记的过氧化物酶结合，形成可溶性的亲合素-生物素化酶复合物（avidin-biotin-peroxidase complex, ABC）。当其与生物素标记的抗体（直接法）或抗抗体（间接法）作用时，ABC中亲合素尚未饱和的位点可与抗体分子上标记的生物素结合，从而形成一个多级放大体系，有效提高了酶反应的敏感性。 4、分子生物学方法 PCR PAGE 五、有关肿瘤标志物 角蛋白 来源及分布 角蛋白（keratin）属中间丝细胞骨架蛋白，是存在于上皮细胞内、分子量为40-70kD的一组蛋白质。 主要用途 角蛋白是上皮细胞及其肿瘤的最佳标记物之一，综合肿瘤组织形态学，可用于癌与其他恶性肿瘤如未分化癌与淋巴瘤、上皮性肿瘤与恶性黑色素瘤、胸腺瘤与胸腺淋巴瘤及转移肿瘤等的鉴别。 上皮膜抗原 来源及分布 上皮膜抗原（epithelial membrane ant