2013-2分子生物学实验理念.docVIP

绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达1. 构建重组质粒（ ET-28α-GFP）： BamHⅠ.NdeⅠ酶切 回收 用同样的酶切DH5α（ET-28α）获得载体片段连接 获得重组质粒2. 导入与表达： 重组质粒 转化DH5α 酶切鉴定 质粒（ET-28α-GFP）转化BL-21（ET-28α-GFP） 诱导表达与检测 获得绿色荧光蛋白 1 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化DH5α） 大肠杆菌感受态细胞的制备1.接种：挑一大肠杆菌单菌DH5αBL21）落放入mL LB液体培养基，37 ℃培养过夜。 2.活化大肠杆菌：取3m新鲜的LB液体培养基加入50-150μ的过夜菌，培养2-3个小时。.将的DH5αBL21）培养液在无菌条件下个于eppendorf管中,冰上放置10 min,然后于4 ℃下000 rpm 离心min； 4.在无菌条件下弃去上清, 转入到一个 eppendorf管中。用0.1 mol/L 的CaCl2溶液轻轻悬浮细胞,冰上放置10 min, 4℃下000 rpm 离心 min； 5.加入100μL预冷的0.1 mol/L的CaCl2 溶液缓和菌液，放置冰上。即成感受态细胞悬液可-80 ℃长期保存。pET-28α-GFP 的连接产物（或者质粒） 1.取2个无菌离心管，分别加入100μL DH5α感受态