HC2产品基本知识探索.pptxVIP

digene HC2 HPV检测临床应用及其优势介绍 WH市场部 Hybrid Capture? 2（HC2 ）--杂交捕获二代 利用基因杂交、化学发光、信号放大的原理 在分子水平同时检测被WHO确认的13种高危型-HPV 病毒DNA 96test/kit( 88病人标本/盒） HC2 HPV检测流程： 样本收集：样本类型及采样注意事项 样本处理过程 检测步骤 HC2 HPV检测 采样器 用于HPV检测的最常见的样本 是:  The hc2 DNA Collection Device采样器?采集的STM标本 The ThinPrep? 样本 (Hologic) 新鲜宫颈活检标本（截面为2-5mm的宫颈活检组织） HC2 HPV检测宫颈取样 插入宫颈口1-1.5cm，直到刷子最外圈接触到外宫颈逆时针方向,旋转三圈,停留十秒 将刷子底部放到转移管中，在划线处折断杆子，将整个刷子留在转移管中 HC2 HPV检测宫颈取样标本保存 HPV标本的保存 1、室温下：保存2周 2、 2-8℃：再保存1周 3、 -20℃：保存3个月或更长 标本保存注意事项 使用专用的DIGENE HPV采样器（含试剂，可抑制细菌生长，保持DNA完整性） 注：切勿将小刷子扔掉，以保留足量标本 采样前三天内不要阴道内用药或冲洗，避免经期采样 采样前不要进行醋酸/碘液涂抹 开盖、折断小刷子时勿大力震荡试管，以免试剂溅出影响检测或标本溅出造成污染 少量血液不影响检测结果 在试管壁上标明患者名称和年龄盖紧瓶盖 HC2 HPV检测流程： 样本收集：样本类型及采样注意事项 样本处理过程 检测步骤 不同类型的样本 hc2 DNA Collection Device采样器 The ThinPrep 细胞保存液 细胞溶解: 只保留DNA 保留细胞 不同类型的样本处理 Thinprep 样本在进行 hc2检测前进行转换 样本转换试剂盒 CCU PreservCyt （即Thinprep样本）的转换流程 Step 1 Step 2 Step 3 Step 4 Step 5 摇动 / 漩涡混合 10 sec. 取出 4 mL 加入 400uL 转换缓冲液 加盖和漩涡混合 离心 15 min 取出上清液 Step 10 Step 9 Step 8 Step 7 Step 6 取出残余液态 150 uL 变性液 加盖漩涡混合 30 sec 65° 水浴 15 min. 漩涡混合15-30 sec. 在水浴 30 min. 漩涡混合 5 sec. 去盖，取75 uL 加入微孔板 用Digene自己的采样标本，可直接进行检测! Step 1 Step 2 Step 3 500uL混有指示剂的变性剂加入样本 加盖和漩涡混合 (MST) 65° 水浴 45 min. 漩涡混合 5 sec HC2 HPV检测流程： 样本收集：样本类型及采样注意事项 样本处理过程 检测步骤 HC2 技术的检测步骤 Denature specimen Hybridize with RNA probe Capture and detect hybrids Luminescence Hc2检测方法分为简单的5部 变性 溶解细胞，释放DNA单链 杂交 全长病毒 RNA探针与病毒靶DNA结合 捕获 DNA:RNA 复合物被包被在微孔板上的抗体捕获 一抗特异性结合DNA:RNA 复合物 杂交检测 用二抗结合捕获后的复合物 二抗偶联有碱性磷酸酶 发光信号产生 加入碱性磷酸酶的底物 产生化学发光信号 HC2 HPV检测步骤-----简单的5步 Step 1:变性 溶解细胞，解链和变性核酸, 释放HPV DNA单链 Step 2:杂交 全长病毒 RNA探针与HPV病毒靶DNA结合，形成RNA:DNA 复合物 Step 3:捕获 RNA:DNA 复合物被包被在微孔板上的抗体捕获 一抗特异性结RNA:DNA 复合物 二抗 偶联的碱性磷酸酶 Step 4:杂交检测 用二抗结合捕获后的复合物二抗偶联有碱性磷酸酶 Step 5:产生发光信号 加入碱性磷酸酶的底物 产生化学发光信号，仪器判读发光信号