第十章转基因植物试卷.ppt

第十章 转基因植物 Transgenic Plant 转基因植物 将外源基因导入植物细胞，经组织培养， 获得能够表达外源基因的植物称为转基因植物。 ? 抗虫 ? 抗病 ? 抗逆 ? 生产药物 由中国农科院开发的Bt棉对棉铃虫有显著的抗性，与对照相比减少农药用量80。 中国黄金大米事件 　不会引起过敏的大豆 彩色玉米 目的基因 基因载体 重组体 分 切 接 转 筛 表 基因工程 总体技术路线 1983年，转基因烟草问世 ---世界上第一例转基因 植物。 1987年，转基因油菜、棉花产生 转基因水稻、玉米、小麦、甘薯等陆续出现。 转基因作物商业化：遍布6大洲 预测：2020年世界上80％-90％的农作物将是转基 因植物 转基因植物研究发展 受体材料的选择 受体是指用于接受外源DNA的转化材料。良好的植物基因转化受体系统应满足如下条件： 1、高效稳定的再生能力； 2、受体材料要有较高的遗传稳定性； 3、外植体来源方便，如胚和其它器官等； 4、对筛选剂敏感； 5、转化率高。 常用的受体材料有以下几大类型: 1.愈伤组织再生系统 外植体材料经过脱分化培养诱导形成愈伤组织，转化（带有目的基因质粒的农杆菌侵染），分化培养获得再生植株。 优点：外植体来源广，繁殖快，易接受外源基因，转化效率高。 缺点：遗传稳定性差、嵌合体，因此需要连续的再生系统。 2.直接分化再生系统 外植体细胞不经过脱分化形成愈伤组织阶段，而是直接分化出不定芽形成再生植株。 优点：周期短、操作简单，体细胞变异小，遗传稳定 缺点：材料局限，转化率低。 3.原生质体再生系统 原生质体恢复细胞壁具有分化再生能力，是应用最早的再生受体系统之一。 优点：高效、广泛地摄取外源DNA或遗传物质，获得基因型一致的克隆细胞，所获转基因植株嵌合体少，适用于多种转化系统； 缺点：不易制备、再生困难和变异程度高。 4.胚状体再生系统是指具有胚胎性质的个体。 优点：个体数目巨大、同质性好，接受外源基因能力强，嵌合体少，易于培养、再生。 缺点：技术含量高，多数植物不易获得胚状体。 5.生殖细胞受体系统 以生殖细胞如花粉粒、卵细胞等受体细胞进行外源基因转化的系统。 一是利用组织培养技术进行小孢子和卵细胞的单倍体培养、转化受体系统； 二是直接利用花粉和卵细胞受精过程进行基因转化，如花粉管导入法，花粉粒浸泡法，子房微针注射法等 植物转基因的基本技术路线 ◆ 获得目的基因，克隆到载体上扩增 ◆ 受体细胞培养：如植物愈伤组织等 ◆ 目的基因导入受体细胞 ◆ 培养转化细胞 ◆ 筛选、培植、鉴定 苏云金杆菌 毒蛋白基因 质粒载体 重组质粒构建 农杆菌 棉花 棉花细胞 侵染转移 转基因棉花 抗虫棉的构建 转基因方法 ◆ 直接导入法 基因枪法（1987年） ◆ 载体介导法：农杆菌介导转化法（1974年） ◆ 病毒感染法 基因枪介导的DNA转移 基因枪法最早是由美国康奈尔大学的Sanford最先提出的。它通过高速飞行的金属颗粒将包被其外的目的基因直接导入到受体细胞内，从而实现基因转化的方法。1992年，世界首例转基因小鼠就是通过该法获得的。 基因枪转化的原理 载体介导法：根癌农杆菌介导的基因转移：Ti质粒(tumor-inducing plasmid) 转移DNA(transfer DNA,T-DNA) Ti plasmid：双链共价闭合环状DNA分子，约150～200Kb 农杆发根菌的生物学特性 发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes） ：土壤细菌，能侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物 Ri质粒(root-inducing plasmid)：T－DNA区、Vir区两个功能区 T-DNA区插入到寄主植物基因组中，表达决定发根生长和冠瘿碱合成的基因，冠瘿碱的检测是评价植物转化是否成功的证据之一 。 Vir区不插入寄主植物基因组DNA中，但与T-DNA的转移有关，其缺失或突变不能使感染的植物出现发根。 Ti质粒介导的转化方法 Ti质粒衍生的克隆转化载体必须具备以下的结构 特点 1）具有选择标记基因 2）DNA复制起始位点 3）T－DNA右边缘序列 4）单克隆位点 5）vir区域 方法：利用双元载体系统和共整合载体系统解决 共整合转化--载体和农杆菌质粒重组过程 双元载体转化 花粉管通道法 将外源DNA片段在自花授粉后的特定时期注入 柱头或花柱，外源DNA沿花粉管通道通过珠心进 入胚囊，转化不具备细胞壁的受精卵或早期胚性 细胞。由 microinjection cell-to-cell infect