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分离纯化方法2电泳技术（上） Electrophoresis第一节　电泳概述第二节　核酸电泳第三节　蛋白质电泳 第一节 电泳概述 电泳是指荷电的胶体颗粒在电场中的移动。 ——Arne Tiselius(1959), Electrophoresis Theory, Methods and Applications. 一、电泳的发展 二、电泳的定义及常用术语 三、电泳技术的基本原理 四、电泳技术的种类 五、电泳的支持介质 六、电泳系统 一、电泳技术的发展 1809年，俄国物理学家Re?ss进行了世界上第一次电泳实验。 二、电泳的定义及常用术语 1、电泳(electrophoresis，简称EP) 带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极方向移的现象。 移动的速度与颗粒带电的强弱、分离介质的阻力、电极液的粘度和电场强度等因素有关。 生物大分子在电场中移动的速度除上述因素外还与分子形状、相对分子质量大小、分子的带电性质等因素有关。 2、电泳迁移(electrophoretic migration)：EM，单位是cm 在电泳过程中，带电粒子在电场的作用下做定向移动。 3、迁移时间(migration time)：用t表示，单位是min 在电泳过程中，带电粒子在电场的作用下做定向移动所用的时间。 4、电泳速度(electrophoretic velocity)：用V表示 在单位时间内，带电粒子在电场的作用下做定向运动的距离，单位是cm /min。 5、电场强度(electric field strength)：用E表示 在给定的电泳支持物两端电极施加电压后所形成的电效应，单位是 V/cm。 E = V /L 式中V为电压，L为两端电极的距离。 在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。 若将带净电荷Q的粒子放入电场，则该粒子所受到的电荷引力为： F引=E Q （1） 在溶液中,运动粒子与溶液之间存在阻力F阻 F阻=6πrηV 当F引=F阻时 EQ= 6πrηV 由上式可以看出,粒子的移动速度(泳动速度V)与电场强度(E) 和粒子所带电荷量(Q)成正比,而与粒子的半径(r)及溶液的粘度 (η)成反比。非球形分子（如线状DNA）在电泳过程中受到更大 的阻力，即粒子的泳动速度与粒子形状有关。 由（4）可知，带电粒子的泳动速度受电场强度影响，使得同一种带电粒子在不同电场里泳动速度不同，为了便于比较，常用迁移率 m（或称泳动度，指带电粒子在单位电场强度下的泳动速度）代替泳动速度表示粒子的泳动情况。 m = V/E = Q/6πrη （5） 由上式可以看出，迁移率仅与球形粒子所带电荷数 量，粒子大小及溶液粘度有关而与电场强度无关。 由于蛋白质、氨基酸等的电离度α随溶液pH变化而不同，所以实际上常使用有效迁移率。有效迁移率U为迁移率m和当时条件下电离度α的乘积。 U = m α （6） 将（6）式代入（5）式得： U = （7） Ｂ、带电颗粒移动的影响因素 η：介质黏度；r：分子半径；υ：分子移动速度; E：电场强度； q ：颗粒净电荷 1、颗粒性质 形状：越接近球形， υ ↑ 大小： 直径越小， υ ↑ 净电荷：净电荷越大， υ ↑ 带电颗粒移动的影响因素 2．电场强度：E ↑ 则 υ ↑。 根据电场强度分类： (1)常压电泳：E=2-10v/cm (2)高压电泳： E=70～200V／cm 。 带电颗粒移动的影响因素 3．溶液性质 pH：决定带电颗粒的解离程度和所带净电荷的量。为使电泳时pH值恒定，必须采用缓冲液作为电极液。 溶液的离子强度：0.02～O.2之间。缓冲液离子强度过高，则颗粒的电动电势越小，泳动度也越小。 粘度：粘度大，则 υ ↓ 带电颗粒移动的影响因素 4．电渗：促进或阻碍泳动 带电颗粒移动的影响因素 5．焦耳热：Q=I2RT 焦耳热大：分辨率下降，温度过高会使样品中的生物大分子变性失活，融化或烧断支持介质。 6．筛孔 筛孔大则泳动速度快。 四、电泳技术的种类 按支持介