形态实验-法医学血痕检验教学.ppt

血痕检验 血痕检验 是否是血 是否人血 遗传标记，个人识别 其他——出血量、出血时间、部位 肉眼检查 部位：室内、室外；受害者、嫌疑人 颜色：干燥程度和颜色----推测时日 形状：滴状、流柱状、喷溅状、擦拭状、血印痕、血泊、血水、其他 范围：出血量 预实验——筛除——灵敏高 联苯胺试验 确证实验——证明——灵敏度低 血色原结晶试验——高山结晶试验 种属鉴定 免疫学方法/分子生物学方法 联苯胺试验 原理：血中过氧化物酶活性物质可使H2O2释放活性氧，将试剂氧化显色 操作：针尖大小检材 顺序滴加试剂 冰醋酸—联苯胺-- H2O2 注意：微量、致癌，结果判断 血色原结晶试验—高山结晶试验 原理： 血红蛋白在碱性条件分解成正铁血红素和变性珠蛋白， 经还原剂作用与含氮化合物结合， 生成血色原结晶 呈樱红色、针状或菊花状 血色原结晶试验—高山结晶试验 操作： 血痕纤维0.3~0.4cm，一端稍分离 加高山试剂 加热 镜检 注意：加热方法、结果判断 种属鉴定 原理：特异性抗体与可溶性抗原相遇，当比例适当，可产生抗原抗体复合物，在两液界面出现白色沉淀 个人识别——遗传标记检验 血型 酶型 DNA多态分析 性别鉴定 血型测定——ABO系统 有血型抗原，又有天然抗体 试剂易得，方法简单 分布广泛 抗原可保存数十年，抗体可保存数周至数月 凝集素测定——玻片法 原理： 血痕经浸泡，干燥的凝集素溶出 遇相应指示红细胞，出现凝集。 判断被检血痕中有相应凝集原 凝集素测定——玻片法 操作： 2×2mm血痕三块分别放置于标记A、B、O的载玻片上 加相应型0.1~0.2%红细胞 保湿盒内，每十分钟镜检 注意：凝集素是免疫球蛋白易破坏；结果判断 凝集原测定——吸收法 原理： 血痕中的血型物质可与相应抗血清中的凝集素特异结合（吸收），使之效价显著降低甚至消失 遇指示红细胞，凝集力明显减弱或不凝 表明血痕含有相应的凝集原 凝集原测定——吸收法 操作： 取血痕1×1cm两份置于两个标记好的试管中 分别滴加抗A、抗B血清4~6滴，震荡混合、充分浸透 37度水浴30分钟 凝集原测定——吸收法 准备两列试管，分别标记好 分别取上清液两滴，加入两个试管中， 分别用生理盐水稀释成1:2, ~ 1:16 每个试管中加入相应的2%指示红细胞一滴 1500转/分，离心30秒 肉眼观察凝集情况 凝集原测定——吸收法 注意： 必须做已知和空白对照 抗体效价下降越显著，表明血痕中含相应凝集原的证据越充分 判断标准： 对照正确，血痕与血清的凝集程度比原效价相差三级或以上，说明备件血痕中有相应凝集原 血痕的DNA多态分析 * * 法医学系