动物细胞工程核移植分析.pptVIP

专题二 细胞工程 细胞工程概念 原理和方法、操作水平、目的、分类 指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。根据操作对象不同，可分为植物细胞工程和动物细胞工程两大领域。 细胞全能性 1、概念 2、为什么已经分化的细胞依然具有全能性？ 3、在生物发育过程中，为什么细胞没有表现 出全能性，而是分化成各种组织和器官？ 4、细胞全能性大小比较 细胞全能性大小比较 ①受精卵胚胎干细胞生殖细胞体细胞 ②体细胞：植物细胞动物细胞 ③分化程度低的细胞分化程度高的细胞 ④ 分裂能力强的细胞分裂能力弱的细胞 ⑤随着细胞分化的程度不断提高，细胞的全能 性逐渐减小。 有关细胞全能性的叙述，不正确的是（ ） A.受精卵在自然条件下能使后代细胞形成完整个体， 因此其全能性最高 B.生物体内细胞由于进行分化，全能性不能表达 C. 卵细胞与受精卵一样，细胞未分化，全能性很高 D.在一定条件下，植物细胞离体培养能表现出全能性 C 动物细胞工程 1、常用技术手段 2、基础技术 3、应用 动物细胞工程 通常采用的技术手段 动物细胞融合 单克隆抗体 动物细胞核移植 是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞培养 资料：烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？ 取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植。 一、动物细胞培养的概念 就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 想一想：动物细胞培养的基本原理是什么？ 原理：细胞增殖（有丝分裂） 二、动物细胞培养的操作过程 思 考 1、选取什么样的组织材料？ 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 2、为什么选用上述组织材料？ 增殖能力强，分化程度低，更容易培养 思 考 3、为什么将组织材料分散成单个细胞？ 4、如何将组织分散成单个细胞？ 剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间 用胰蛋白酶处理，组织就会分散成单个细胞，说明？ 说明细胞与细胞间的主要物质是蛋白质 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，因此必须控制好胰蛋白酶的处理时间。 5、动物细胞培养中的两个显著特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 细胞的接触抑制 接触抑制 单层细胞 思 考 6、什么是原代培养？什么是传代培养？ 原代培养与传代培养的分界点？ 分瓶的继续培养 胰蛋白酶使用几次？ 两次 7、传代培养的三个阶段 ①、10代以内：容易传代，传代细胞正常的二倍体核型不会改变。 核型（染色体组型）：一个细胞内所有染色体的大小、形状和数量特性的汇总。 ②、10-50代左右时：细胞增殖缓慢，以至于完全停止，此时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。 ③、50代之后：如果继续传代培养，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这些细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展。 遗传物质改变——细胞系 接触抑制 细胞膜表面糖蛋白减少，细胞黏着性降低。 8、人们一般保存的是哪类细胞？为什么？ 思 考 9、动物细胞培养的结果？ 获得细胞群 是否体现出细胞的全能性？ 没有 二、动物细胞培养的操作过程 分离组织（幼龄动物） 分散细胞（胰蛋白酶） 原代培养（细胞增殖） 传代培养（细胞增殖） 分装（胰蛋白酶） 三、动物细胞培养条件 能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？ 1、无菌、无毒的环境 对培养液和培养用具进行无菌处理； 在培养液中添加一定量的抗生素; 定期更换培养液； 2、营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等 动物血清、血浆 3、温度和pH 温度36.5±0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 培养皿或松盖培养瓶，O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需的。 CO2维持培养液的pH。 合成培养基、液体培养； 回 顾 1、动物细胞培养概念、原理 2、动物细胞培养过程 细胞贴壁、细胞接触抑制、原代培养、传代培养 3、动物细胞培养条件 四、动物细胞培养技术的应用 1、生产生物制品