环境工程微生物学重点幻灯片.docx

作业部分： 作业1 叙述革兰氏染色的机制和步骤。 答：1884年丹麦细菌学家Christain Gram创立了革兰氏染色法。将一大类细菌染上色，而 另一类染不上色，一边将两大类细菌分开，作为分类鉴定重要的第一步。革兰氏染色的机制有如下两点： （1）革兰氏染色与细菌等电点有关系：革兰氏阳性菌带的负电荷比革兰氏阴性菌多。它与草酸铵结晶紫的结合力大，用碘—碘化钾媒染后，两者的等电点均得到降低，但革兰氏阳性菌的等电点降低得多，故与草酸铵结晶紫结合得更牢固，对乙醇脱色的抵抗力更强。草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物不被乙醇提取，菌体呈紫色。而革兰氏阴性菌与草酸铵结晶紫的结合力弱，草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物很容易被乙醇提取而使菌体呈无色。 （2）革兰氏染色与细胞壁有关系：革兰氏阳性菌的脂质含量很低，肽聚糖的含量高。阴性菌相反，因此用乙醇脱色时，革兰氏阴性菌的脂质被乙醇溶解，增加细菌细胞壁的孔径及其通透性，乙醇很容易进入细胞内将草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物提取出来，使菌体呈无色。革兰氏阳性菌由于脂质含量极低，而肽聚糖含量高，乙醇既是脱色剂又是脱水剂，使肽聚糖脱水缩小细胞壁的孔径，降低细胞壁的通透性，阻止乙醇分子进入细胞，草酸铵结晶紫、碘—碘化钾复合物被截留在细胞内而不被脱色，仍呈现紫色。 染色步骤如下： 1在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。 2用草酸铵结晶紫染色1min，水洗去掉浮色。 3用碘—碘化钾溶液媒染1min，倾去多余溶液。 4用中型脱色剂如乙醇或丙酮酸脱色，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色。革兰氏阴性菌被褪 色而成无色 5用蕃红染液复染1min，格兰仕阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和格兰仕阴性菌即被区分开。 何谓细菌菌落？细菌有哪些培养特征？掌握这些知识有何实践意义？ 答：细菌菌落就是由一个细菌繁殖起来的，有无数细菌组成具有一定形态特征的细菌集团。 培养特征： a在固体培养基上的培养特征就是菌落特征。 b在明胶培养基上的培养特征就是将不停形态的溶菌区，依据这些不同形态的溶菌区或溶菌与否可将细菌进行分类。 c在半固体培养集中的培养特征：呈现出各种生长状态，根据细菌的生长状态判断细菌的呼吸类型和鞭毛有无，能否运动。 d在液体培养基中的培养特征：根据细菌的属和种的特征的不同长成不同的生长状态。 掌握这些知识可以用来鉴定细菌的呼吸类型和运动性。 作业2 1简述土壤石油烃污染微生物修复的各种类型 答：目前，石油烃类污染的土壤，其生物修复技术主要有两类：一类是微生物修复技术， 按修复的地点又可分为原位微生物修复和异位生物修复；另一类是植物修复法。 微生物修复法： （1）原位生物修复：是将受污染土壤在原地处理。土壤基本不被搅动，对土壤的水饱和区加入营养盐、氧源；注入微生物以提高生物降解的能力。在污染区原地钻一组抽水井，用抽水泵抽取地下水，使地下水呈流动状态，促使微生物和营养物均匀分布。地下水经过4——6月处理后，恢复到原来水平，加入土壤改良剂，地下水就可循环使用。 (2).异位微生物修复: a.现场处理法，以土壤耕作方式处理污染土壤，将含污染物的土壤施在未污染的土地上，通过施肥、灌溉和加石灰等措施，进行耕作翻土以改善土壤的通气状况，保持最合适氧量，水分和PH依赖“土著”微生物的作用，降解施在涂层中的污染物。为提高处理效果，可投加驯化的微生物增强降解作用。 b.预制床（挖掘推置法）：事先挖掘一定形状的规模的预制床（类似固体废物的填埋），铺设滤液收集管道，水循环管道系统和排水系统，在预制床的底部铺上渗透性低的物质，再将污染土壤转移到预制床上，通过施肥，灌溉，调剂PH,适当添加表面活性剂，再加入微生物降解其中的污染物。 c．堆置处理法：污染土壤的堆置处理有类似有机固体废物的堆肥。选适当地点建造堆置处理场，为了防止污染物向地下水或更大的地域扩散需铺设防渗漏底层，并铺设通风管道，然后将受污染的土壤从污染地区挖掘起来，运送到处理场堆放，可堆成条堆形，两边铺成上升的斜坡，以自然通风方式进行生物处理。 d.生物反应器法：将污染土壤置于一专门的反应器中处理，有间歇式和连续式两种，生物反应器可建在现场或特定的处理区，它的处理过程：先将污染土壤挖出，以土水比1：2的比例与水混合为泥浆，然后转送如反应器内。加入驯化的微生物、营养盐及表面活性剂以提高降解速率，温度控制在20-25度，并通空气，其内有搅拌装置，可使土壤、微生物等充分混合，因而处理速度较快，效果好。 e.厌氧生物修复法 例如土壤泥浆反应器中，在投加厌氧颗粒污泥的条件下修复芳香烃污染的土壤。又如利用土壤泥浆中“土著”厌氧微生物对五氯酚（PCP）厌氧还原脱氯作用，将含五氯酚浓度为30MG/KG的模拟污染土壤进行处理，经28D运行，PCP的平均降解速