剪接因子PSF是一个大的复合体的一部分.docxVIP

剪接因子PSF是一个大的复合体的一部分，这个大的复合体是在前mRNA缺失的情况下组装成的，它包含了所有的五种snRNPs（PCC复合体能在缺失pre-mRNA的情况下形成，含有PSF和snRNPs）ABSTRACT? PSF（polypyrimidine tract binding protein-associated splicing factor，PSF蛋白是一种多功能的DNA/RNA结合蛋白，它能抑制原癌基因的表达，在人和小鼠中具有抑制肿瘤的作用）蛋白是一个很大的核蛋白，参与了包括转录、RNA剪接等众多生理过程。PSF蛋白被证实能直接与U5 snRNA结合并且在许多被纯化了的剪接复合体中被发现。在这篇文章中，作者展示了当hela细胞核提取物处于适于剪接的条件下时，PSF蛋白被发现作为一个很大的复合体的一部分，这个复合体包含了五种snRNPs和大部分已知的剪接因子。在4℃下，不需要添加外源的pre-RNA该复合物就能形成，并且对盐离子敏感。沉降实验和通过质谱鉴定单独的组分揭示了该复合体附着有许多核内的因子，这些作用因子与剪接体组分重叠。?INTRODUCTION? 大多数真核生物的基因都能被转录成pre-mRNA，pre-mRNA中含有被间隔序列（内含子）隔断的编码序列（外显子）。pre-mRNA的剪接过程就是在翻译之前，含子被有效且准确的切除，而外显子被连接起来。剪接过程包括两次连续的转酯反应。第一步转酯反应包括5’端剪接位点的断裂，产生一个与3’端内含子相连的套马索中间体。第二步反应中外显子被链接，内含子套马索被释放。剪接过程的执行需要剪接复合体，剪接复合体是一个由小核糖核蛋白颗粒（包括U1,U2,U4/U6和U5 snRNAs及其他的非snRNP蛋白因子）组成的庞大复合体。snRNAs在剪接体的组装和两步转酯反应中发挥重要作用。外显子/内含子定界的准确性需要pre-mRNA、snRNAs和其他剪接因子之间的相互作用来实现。?? 根据现有的细胞提取和体外剪接的研究，大多数现有的剪接体组装的模型都表明一条明确的途径，即需要ATP和pre-mRNA底物。剪接复合物的形成起始于U1 snRNP识别5’剪接位点，然后U2 snRNP辅助因子（U2AF）异质二聚物结合聚嘧啶区，由此形成独立元件早期复合体（E complex）。U2AF结合聚嘧啶区能招募U2 snRNP结合于分支点序列并形成A complex，当U4/U6、U5 三snRNP加入进来，A complex转变为B complex。伴随着一系列动态的 RNA/蛋白重新排列，B complex转变为C complex，C complex是一个短寿命的有活性的剪接体。每种独立的剪接复合体都经过不同的策略来纯化和分析。这些复合体都含有大量的snRNP和非snRNPC蛋白，这些组分参与了剪接位点的识别、剪接体的组装和调控剪接过程。近年来，对一些复合体的鉴定研究似乎与之前关于剪接复合体的形成相悖。这些复合体包括酵母Cwf/Cwc复合体、lnRNP复合体、一个大于150S的包含U2/U4/U5/U6的复合体，能与U2和U6配对、从啤酒发酵的酵母菌中提取的五snRNP、从Hela细胞核提取的五snRNP复合物。这些复合物间功能上的联系还需要进一步的研究，但是已经知道的是他们中的任何一种都不能单独地发挥剪接作用。? PSF蛋白大小为100 kDa，PSF蛋白在剪接过程的许多步骤中都发挥作用，但是其确切作用还有待研究。PSF蛋白能在剪接复合体的早期（H、A、B）、晚期（C）、U4/U6.U5 三snRNP和U5 snRNP中一起纯化出来，并且在核散斑中被发现，与许多剪接因子定位在一起。PSF蛋白的由一个N端富含甘氨酸的区域，一个富含脯氨酸/谷氨酰胺（P/Q）的区域，两个RNA识别基序（RRMs）和C端的两个细胞核定位信号组成。p54nrb蛋白（鼠同源蛋白）与PSF蛋白有十分相似的结构域并且能够结合PSF蛋白。PSF和p54nrb的结合能与RNA聚合酶II的C端结构域（CTD）相互作用，然后与转录/剪接复合体结合5’剪接位点，接着继续进行转录和剪接。? 除了参与剪接过程，PSF蛋白还参与了众多的细胞核内事件。PSF蛋白在许多情况下能作为转录调控因子，例如在调控生长因子来刺激基因表达，又可以作为共抑制因子通过Sin3A招募脱乙酰基酶（HDACs）然后诱导沉默，还能在cAMP的刺激下作为复合体的一部分激活人CYP17基因的启动子。PSF蛋白还能调控拓扑异构酶I的活性，或者作为间断的双链DNA修复因子，或者在细胞核中保留超编辑的RNA。最近的研究表明，PSF蛋白能抑制HIV-1 gag/pol和env mRNAs的表达（典型的逆转录病毒的基因组的RNA基因组长度约为7000-10000个核苷酸