稳定同位素示踪技术精编.pptVIP

第五章 稳定同位素示踪技术;第一节 稳定同位素示踪原理; 丰度 某种同位素的原子数在该元素总的原子数中所占的百分数。通常以原子百分数表示。例如： 15N 15N + 14N 自然物质中某元素的同位素丰度称为自然丰度或天然丰度。; 元素; 原子百分超 某一同位素丰度与自然丰度之差称为同位素的原子百分超。 将15N浓缩到自然丰度的10倍，其原子百分超是多少？ 3.65% - 0.365% = 3.285% 在实际测定中，应该采用对照组生物样品的自然丰度。; 二、稳定同位素示踪的基本原理和特点 （一）基本原理 1. 自然界中一种元素的同位素组成（自然丰度）是相对恒定的。 2. 元素的同位素具有相同的化学性质。 3. 同一元素的同位素间存在质量差异。 ; （二）稳定同位素示踪法的特点 优点: 1. 无放射性； 2. 操作安全，对人无辐射损伤； 3. 不污染环境，试验范围不受限制； 4. 试验周期不受限制； 5. 可以代替某些元素的放射性同位素难以进行的示踪试验。; 局限性: 1. 标记化合物偏高; 2. 样品制备复杂; 3. 所需的仪器如质谱仪比较昂贵。; ; 一、15N丰度的选择 不同丰度的15N标记化合物价格差异比较大，因此，在试验允许情况下，尽可能应用低丰度的。 15N丰度的选择主要考虑两个因素： 1. 试验中15N被普通N稀释的程度； 2. 15N分析仪器的精确度。; 二、15N示踪试验的布置 一般采用微区试验。 三、15N测样的制备 测定15N的质谱仪对测样的要求是以简单的分子态进行。; 具体制备过程如下： 1. 将样品中的标记氮转化成铵 用凯氏法将含氮样品在增温剂和催化剂 的参与下，用浓硫酸消煮，使其中所含的各种形态的氮转化为氨，与硫酸结合形成硫酸铵，然后加碱蒸馏，使氨吸收在硼酸溶液中，用标准酸测定样品的全氮量。 一般用硫酸钾、硫酸铜和硒粉组成的混合催化剂，三者的质量比为 100：10：1。 ; 2. 将铵转化成氨气 在高真空气化装置中，用碱性次溴酸钠将铵氧化而产生氮气，其反应式： 2NH4+ + 3NaBrO N2↑+ 5H2O + 3NaBr ; 四 、质谱法测定15N丰度 （一）质谱仪器的工作原理 利用电磁学原理，使带电粒子按照质荷比进行分离，从而测定其质量的分析仪器。; MAT 253型同位素比值质谱仪为德国Finnigan公司制造，可以精确测量13C、15N、18O、34S和H/D的相对同位素丰度。最多有10个积分通道用于多种离子流的同时测量。 ;Flash EA1112型元素分析仪与MAT 253型同位素比值质谱仪联机（EA-C(ConFloIII)-IRMS）可以在线测定固体(或液体)样品的C、N同位素组成。 ;;; 1/2M1v12 = eV （1） M1v12 R1 根据上述两式可得： ; 如带电粒子的电荷数以电子所带的电量为单位，则上式可改写成： 或： R = (3) ; (3)式表示了磁式质谱仪的工作原理，从中可得到如下结论： 1. 在加速电压V不变的情况下，可以通过连续改变磁场强度H而得到同一R而不同M的扫描质谱图，此即为磁扫描。 2. 在磁场强度H不变的情况下（永磁铁），可以通过改变加速电压而得到同一R而不同M的扫描质谱图，此即为电压扫描。;（二）15N质谱分析的计算公式 1. 质谱峰的选择 氮分子经电离后产生质量不同的离子： 离子种类 质荷比 [15N15N]+ 30 [15N14N]+