核医学 其它体外分析+分子核进展分析.pptVIP

含意：除RIA之外的一切体外放射分析，但它的应用有一定局限性。 一、竞争蛋白结合分析（CPBA）： 待分析物的结合剂：蛋白质 举例：TBG甲状腺素结合球蛋白→甲状腺素 CBG皮质醇结合球pro→皮质醇 SHBG性激素结合球pro→皮质醇 内因子结合蛋白→B12 视蛋白→视黄醛 蛋白激酶→CAMP、cGMP 牛乳蛋白酶、叶酸还原酶→叶酸 方法：竞争性与RIA相同 优点：这些蛋白天然存在，来源丰富，制备简单，省时，方法学成熟易建立。 缺点： ①比抗体的特异性差、灵敏度也差，为了提高特异性，须在样品制备上下功夫。如纯化，清除干扰物等，不够方便。 ②该类蛋白种类有限，应用范围受限，已有很多被RIA和IRMA取代。 二、放射受体分析RRA RRA与RBA的区别 含义：以受体为结合剂，利用竞争结合原理对配体进行体外分析。 受体的分类： 膜R：一般为水溶性配体（肽类激素、儿茶酚胺等） 胞内R：（浆or核），一般为脂溶性的配体（甲状腺素，类固醇） 受体样品的制备：与RBA相同。 标记品的要求： 要求配体标记前后生物活性不受影响。因为标记配体在RRA时活性往往是降低的。如125I标上一个不影响，如果有二个125I标上就有变化了。 RRA的优点： 1、R与L的结合反应快、瞬间完成、比RIA出结果快。 2、能反应L的生物学活性。如冬眠灵有多种衍生物，它们均能与特异抗体结合，但只有有生物活性的衍生物才能与受体结合，这种测定反应L的生物学活性，而不是免疫活性。所以研究物质结合与功能RRA占有相当的地位。 RRA的缺点： 1、灵敏度比RIA小10—100倍，这是因为不同组织间得来的受体对配体的亲和力有差异，又难以寻找高亲和力的受体。 2、反应条件和环境严格，离子强度，温度、PH值要求高。 3、NSB结合容量大，亲和力又小，NSB较大 临床应用： 1、利用受体来测体内配体的含量。 2、测定体内抗受体抗体的量。 有些疾病发现体内存在着抗R的抗体（自身抗体），如Gtrave’s disease(TSH、甲状腺素R的抗体)；Insulin B型抗症（Ins R-Ab）、重症肌无力（乙酰胆硷受体抗体）。 这类受体的抗体有两类特征： 1、受体结合部位抗体（R—Ab）：当R与Ab成复合物时，复合物中的R可再与配体结合，即R的结合位点保留，但复合物却抑制配体与单独存在的游离R相结合。 2、受体非结合部位抗体（Ab）：它的特征是复合物对配体与R的结合无抑制作用。 三、酶的放射分析（REA） 1、酶的活性（力）分析 概念：酶活性（力）：指酶催化加速反应的能力。 表示法：浓度/时间（反应酶促反应速度的快慢） 酶的反应速度，可以是底物的消耗量或产物的生成量 单位：Kat：（催量）指在规定条件下，每秒钟酶催化1mol底物转变所需要酶的量。 旧单位：U；1 U=16.67kat 符号：底物用S表示， S*指标记的底物 酶用E表示 P产物 反应式：*S+E E*S E*P *P+E 经过一般时间，从反应液中分离出*P，测放。 *P的CPS 酶活性（力）的计算（kat）=--------------------- SA·t·e *P的CPS 酶的比活力（kat/g）=--------------------- SA·t·e·w 可知以下几个量：t（分）：*P的放射性CPS；SA标记物的比活度；e仪器效率；W参加反应的酶的蛋白量（mg）。 ? 优点: 1、灵敏度高（放射性标记品） 2、特性性强，由酶的专一性决定。 3、适用广，绝大多数酶可用此法。 缺点: 1、需高质量的定位标记物 2、分离方法复杂