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乳腺癌细胞三维培养耐药模型的体外构建
生理学报 Acta Physiologica Sinica, April 25, 2016, 68(2): 179–184
DOI: 10.13294/j.aps.2016.0017
179
乳腺癌细胞三维培养耐药模型的体外构建
徐 红1,刘 伟2,张秀珍2,侯 亮3,路英进3,陈佩佩2,张 璨2,冯 迪2,孔 力2,*,王秀丽2,*
大连医科大学1基础医学院机能学实验室;2基础医学院组织胚胎学教研室,大连 116044;3附属第二医院心血管内科,大连
116027
摘 要:本研究旨在体外构建乳腺癌三维(3D)培养模型,部分模拟肿瘤细胞在体微环境,以期建立理想的乳腺癌耐药研究模
型。将乳腺癌MCF-7细胞与胶原支架材料复合,体外构建乳腺癌3D培养模型。用Carmine和HE染色法观察细胞形态,用
CCK-8法检测细胞增殖情况,用活-死细胞染色试剂盒观察细胞活性,检测3D培养和二维(2D)培养条件下细胞对阿霉素、卡
铂、5-氟尿嘧啶的药物敏感性,实时定量RT-PCR检测耐药相关基因P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)和多药耐药相关蛋白2
(mrp2) mRNA表达水平,用Western blot检测P-gp蛋白的表达。结果显示,3D培养组内MCF-7细胞呈聚团生长,细胞增殖及
活性良好。和2D培养组相比,3D培养组细胞对化疗药物的敏感性显著降低,P-gp和mrp2 mRNA水平显著升高,P-gp蛋白水
平升高至5.3倍。以上结果提示,本研究成功构建了具有耐药表型及功能的乳腺癌3D培养模型。该模型对深入阐明耐药发生
相关机制等研究具有重要意义。
关键词:MCF-7;3D培养;胶原支架材料;耐药
中图分类号:R3
Development of three-dimensional breast cancer cell culture drug resistance model
XU Hong1, LIU Wei2, ZHANG Xiu-Zhen2, HOU Liang3, LU Ying-Jin3, CHEN Pei-Pei2, ZHANG Can2, FENG Di2,
KONG Li2,*, WANG Xiu-Li2,*
1Functional Laboratory; 2Department of Histoembryology, College of Basic Medical Sciences; Dalian Medical University, Dalian
116044, China; 3Department of Cardiology, The Second Hospital of Dalian Medical University, Dalian 116027, China
Abstract: The aim of the present study was to develop three-dimensional (3D) culture model, a more pathologically relevant model,
of human breast cancer for drug resistance study. MCF-7 cells were embedded within collagen gel to establish 3D culture model.
Cellular morphology was observed using Carmine and HE staining. Cell proliferation was evaluated by CCK-8 assay, and cell activity
was detected by Live/Dead staining kit. Drug sensitivities of the 3D culture to doxorubicin, carboplatin, 5-fluorouracil were assayed
and compared with those of monolayer (2D) culture. In addition, the levels of drug resistance-related genes P-glycoprotein (P-gp),
mrp2 mRNA expressions were detected by real time RT-PCR. Expression level of P-gp protein was detected by Western blot. The
results showed that MCF-7 cells in
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