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药物血浆半衰期的测定讲述
药物血浆浓度及半衰期测定
药理学教研室
【实验目的】
1.以磺胺嘧啶钠为例学习测定药物半衰期(t1/2)等药动学参数的基本方法。
2.理解常用药动学参数的临床意义
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【实验原理】
磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物,在酸性溶液中,可与亚硝酸钠起重氮反应,产生重氮盐。在碱性溶液中,重氮盐可与酚类化合物(麝香草酚)起偶氮反应,形成橙红色的偶氮化合物。可在525nm波长下进行比色测定。根据Beer-Lamber定律,浓度与光密度成正比关系。其化学反应式如下:
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【材料与方法】
一、实验动物:家兔1只。
二、器材与药品:试管24只,移液吸管10ml,1只;1ml,2只;2ml 7只;移液器1支,吸头若干,试管夹,试管架,离心机,722型分光光度计,手术剪,眼科剪,止血钳,动脉夹,眼科镊,缝线,药棉,纱布,捆扎绳,注射器10ml 1支,5ml 1支。5%磺胺嘧啶钠溶液,7.5%三氯醋酸溶液,0.5%亚硝酸钠溶液,0.5% 麝香草酚溶液(溶于20%氢氧化钠内),草酸钾结晶,25%氨基甲酸乙酯溶液,肝素注射液。
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三、方法与步骤
1.取试管5只,依次用A1、A2、A3……A5标记,各加入7.5%三氯醋酸2ml备用。
2.取试管5只,依次用B1,B2,B3……B5标记,各加入草酸钾结晶几粒(抗凝)。
3.取家兔,称重,
取血方法1:
以乌拉坦(4ml/kg)耳缘静脉注射麻醉,麻醉后将兔背位固定于手术台上,正中切开颈部皮肤,分离一侧颈总动脉,结扎其远心端,并在近心端夹上动脉夹,以阻断血流,再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内,用线打活结固定。
取血方法2:耳缘静脉近心端开始向远心端方向抽血0.5~1ml
4. 耳缘静脉注入3%磺胺嘧啶钠4ml/kg,记录注完时间(准确到分钟)。
5.给药前、给药后5min、10min、20min、30min,松开动脉夹,放血约1ml,分别置于B1 、 B2、B3、B4、B5管,迅速摇匀抗凝,记录取血标本的准确时间。
注意在取血前先要放掉动脉插管内的残血。
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动脉取血约1ml
准确移液100μl
7.5%三氯醋酸2ml
混匀
1500转/分离心5min
准确移上清液1.5ml
1.加0.5%亚硝酸钠0.5ml
2.加0.5%麝香草酚1ml
525nm测光密度
A
B
C
偶氮反应
橙红色
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6.然后准确吸取100μl加入相应的各A管, 各管以1500转/分离心5min,分别取离心后的上清液1.5ml,加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml,摇匀,再加0.5%麝香草酚1ml,可见橙红色反应。以给药前血样作空白对照,用722型分光光度计于525nm波长下进行比色,测定各时间点的光密度,在标准曲线上查得磺胺钠浓度。
C=582D-53
根据吸光度,线性方程 y=582x-53, 计算浓度,求对数值. (Excel – 常用函数 – log10 – 计算对数值. )
将给药时间t 与已求得的磺胺药血浆浓度对数值做直线回归, 根据一级消除动力学公式: lgCt=lgCo+ (-K/2.303)t
回归方程的斜率(-K/2.303), Excel – 常用函数 – slope斜率 – 计算得(-K/2.303)= -19.6, 计算K, t1/2=0.693/K, Vd=D/Co, Cl=K*Vd; 已知 t , lgCt, 计算Co, 从而计算Vd, Cl
给药后不同时间点的磺胺钠钠浓度
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管号
1
2
3
4
5
给药时间
光密度值
磺胺钠浓度
磺胺钠对数浓度
7.计算
根据一级动力学消除公式
t
将给药时间t与已求得的磺胺血浆浓度对数值lg Ct作直线回归,即可得回归方程的斜率(- K /2.303)和截距(lgCo)
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应用公式t1/2=0.693/K,Vd=D/Co,CL=K·Vd,便可求得t1/2、Vd和CL。
1.计算器(Casio fx-180或fx-3600p)的操作步骤
⑴MODE 2 屏幕显示LR,进入线性回归计算状态;
⑵INV AC消除储存器内的全部数据;
⑶XoDo自变量输入; DATA因变量数据输入;
⑷INV A(截距),INV B(斜率) INV r(相关系数);
⑸INV X得期望值。
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2.计算机的操作步骤(以Excel2002为例)
将数据输入Excel中,调用其自带的函数,根据对话框
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