活细胞工作站操作手册-SIBCB.doc

活体工作站操作手册 一、开机步骤 1、打开总电源开关。 2、打开37℃加温器开关（位置在显微镜桌下方，并有温度显示），等温度升至37℃，夏天约需0.5hr，冬天约需1.5hr。 3、打开显微镜开关。位于电脑桌右下方。 4、打开电脑显示屏幕，再打开电脑开关（位置在电脑桌下方）。 5、打开汞灯或单色仪（汞灯开关在左面白色柜子的第二层，）。 6、放倒立柱，放上样品，再放正立柱（放样品前检查显微镜镜头是否下移，以免碰到镜头损坏样品）。 7、如果需用CO2，则接上CO2装置，开二氧化碳钢瓶和空气钢瓶。 8、打开红色混合器开光，并调节混合器输出二氧化碳百分比为5%或10%和流量为3（位置在左面白色柜子第 一层）。 二、软件操作 1、打开leica AS MDW 软件，点击Create New Experiment 或者Open Existing Experiment 点击Create New Experiment 后出现 有两种方法建立新实验 A 先点中一个存在的实验为模版，点击creat new 后，填入相应参数，点ok B 点击clear→new experiment name → create new后， 填入相应参数，点ok 点击Open Existing Experoment ，以一个存在的实验为模版，点击open 2、开始实验设置 点击setup 点击λ，出现波长设置界面，点击add添加所需的激发光，remove取消不需要的激发光，选择完毕点击ok 点击XY出现活动图像采集设置界面，依次查看各个激发光的图像，通过调整焦距和曝光时间。 点击Z，可以确定多层扫描的范围 Set upper确定上限位置，set lower 确定下线位置，z spacing 确定扫面的步宽，number of Z planes 确定扫描层数。 点击T，出现time sequence builder面板，根据实验选择不同的时间参数组合情况。 点击N设置多点拍摄。 先初始化，先将透射光立柱向后倾倒，初始化后，再将立柱竖直放置。 通过xy方向的驱动移动载物台选择需要拍摄的位置，按下add，即将当前位置添加到多点拍摄序列中。之后重复上面的操作，确定下一个拍摄点。设置完成，点ok即可。 3、完成各项所需设置后，点击capture，即开始按设置程序开始获取图像。 点击image view 查看所拍摄的图片。 点击live image 可实时查看拍摄图片。此时可在下次拍摄的空当再次调整焦距等情况 点击stop，暂时停止获图。 获取图像结束后，会出现 窗口，在此窗口可以查看、修饰、动画、保存所获取图片。 制作动画过程 review →gally →export selected to publishing →x Publish→movie maker → 使该荧光图动一遍→ hide options → frames per second (1-30) →write avi. →ok 4、整理图片 多种荧光的图片 1、整理成各组荧光下的时间序列图 点击prode →reorde 排成 2、此时可以分成各荧光下的时间序列图，随后点击实验名→某种荧光→raw image → 点击右键→select all images in made clear 3、file → save selected images as → 重新建立实验名 → ok 三、关机步骤 1、关汞灯或单色仪 2、关加温器开关。 3、关二氧化碳、空气钢瓶开关。 4、关空气混合器开关。 5、取出二氧化碳装置。 6、刻录光盘导出数据。 7、退出软件系统，关电脑。 8、降低显微镜镜头，关显微镜开关。 9、放倒立柱取出样品，用洁净的擦镜纸擦镜头，再放正立柱。 10、关闭总电源开关。 11、登记使用时间、仪器状况（从预热时开始计时）、签名。 12、关空调、关灯锁门。