SOP标准作程序-HDL-C.doc

SOP标准操作程序 高密度胆固醇（HDL）-直接法（货号：OSR6156） 实验原理： 血浆脂蛋白是球形颗粒，它包含各种胆固醇，甘油三酯，磷脂和蛋白质。磷脂，游离胆固醇和蛋白质组成了脂蛋白颗粒的外层，内核主要由胆固醇酯和甘油三脂组成。这些颗粒在血流中用于溶解和运输胆固醇和甘油三酯。 相应的蛋白质和脂类浓度决定着这些脂蛋白的浓度，提供了对它们进行分类的基础1。这些分类是：乳糜微粒，极低密度脂蛋白（VLDL），低密度脂蛋白（LDL），高密度脂蛋白（HDL）。大量的临床研究表明，不同的脂蛋白分类在冠心病的有非常明显和不同的效果2。 在脂类代谢中，HDL的主要作用是通过一个被称为从外围组织到肝脏吸收和运输胆固醇，低HDL-C水平与冠心病的风险增加有关4-9。因此，血清HDL-C的测定对于识别高风险病人是一个有用的工具。NCEP成人治疗小组建议所有二十岁或二十岁以上的成年人至少每五年测量一次总胆固醇和HDL-C水平，以扫描冠心病风险因素9。 HDL-C定量的CDC参考方法结合超速离心和化学沉淀法从其它脂蛋白中分离出HDL，然后用Abell-Kendall测定进行胆固醇测量10。这个方法在常规分析中太费时间，劳动强度太大11。因此，大多数实验室使用一种方法来选择沉淀和移去LDL和VLDL，取上清液进行HDL-C酶测量10。因为这些方法要求前处理和分离步骤，测定程序不能完全自动化。因此，HDL-C的常规测定要求很长的处理时间，有很差的复验性。 方法 奥林巴斯AU640直接HDL-C测定与血清HDL-C直接测定相似，不需要任何前处理或离心。 本方法是双试剂测定（如下所示）。 第一种试剂包含聚合物和多聚阴离子，它们附着在LDL，VLDL和乳糜微粒的表面。这些脂蛋白甚至在清洁剂存在的情况下都是稳定的，清洁剂是作为第二种试剂的一部分被添加进去的，另外一部分是胆固醇试剂剩下的成分。另一方面，HDL颗粒在聚合物和多聚阴离子存在的情况下是不稳定的，它们被清洁剂溶解。因此，只有HDL-C作用于胆固醇测定。 胆固醇脂酶 高密度脂蛋白胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸 胆固醇氧化酶 胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+ H2O2 过氧化物酶 H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT-------------﹥醌亚胺+H2O 标本： 病人准备：无特殊要求。此测定不需要禁食。 类型：血清，EDTA处理或肝素化的血浆。 血清：静脉穿刺收集全血，允许凝块。收集后尽快离心分离血清（3小时内）10。 血浆：EDTA或肝素化的标本。收集后尽快离心分离血清（3小时内）10。 标本稳定性：如果可能，请使用新鲜标本。但是，如果测定不能在收集当天执行，血清可按以下方式储存：2～6℃ 4天， -20℃超过一个星期。 仪器与材料: 仪器：奥林巴斯AU640生化分析仪 材料：奥林巴斯AU640HDL试剂 参与反应成份的最终浓度： MES缓冲液（PH6.5） 100 mmol/L 胆固醇氧化酶 ≥0.2U/mL 胆固醇脂酶 ≥0.15 U/mL 过氧化物酶 ≥0.62 U/mL DSBmT 0.25mmol/L 4氨基安替比林 0.5mmol/L 多聚阴离子 0.02 % 清洁剂 0.2 % 其中含有保护剂。 注意：1. 此试剂为体外诊断用。 2. 不要吸入。吞服有害。 试验用试管的直径在12～16mm。 定标液：Genzyme HDL-C定标液（Cat. No. 80-4529-00）。 试剂准备：试剂1和试剂2都是即开即用的。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯AU640 HDL-C已经建立的程序。 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的典型的方法，AU640批内精密度小于3%，总精密度小于5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 N=100 批 内 精 密 度 总 精 密 度 平均值（mg/dL） SD CV% SD CV% 38.1 0.7 1.8 0.8 2.2 71.4 0.8 1.2 1.1 1.5 方法学比较： 血清：奥林巴斯AU640 HDL-C（方法1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法2），共同做183个病人标本。相关系数达到0.9983，回归