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分子生物学（下） 1、原核基因调控机制的类型与特点 1.负转录调控：调节基因的产物是阻遏蛋白，起阻止结构基因转录的作用。 (1)负控诱导:阻遏蛋白不与诱导物结合时,结构基因不转录; (2)负控阻遏:阻遏蛋白与诱导物结合时,结构基因不转录. 2.正转录调控:调节基因的产物是激活蛋白. (1)正控诱导系统:诱导物的存在是激活蛋白处于活性状态; (2)正控阻遏系统:诱导物使激活蛋白处于非活性状态. 2、乳糖操纵子和色氨酸操纵子 大肠杆菌乳糖操纵子：乳糖——开动大肠杆菌乳糖操纵子——表达利用乳糖的三个酶——细菌利用乳糖。 乳糖操纵子的控制模型内容 （1）Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码； （2）该mRNA的启动区（P）位于阻遏基因（I）与操纵区（O）之间，不能单独起始半乳糖苷酶和透过酶基因的高效表达； （3）操纵区是DNA上的一小段序列（26bp），是阻遏物的结合位点； （4）当阻遏物与操纵区结合时，Lac mRNA的转录起始受到抑制； （5）诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵区相结合，激发Lac mRNA的转录。 大肠杆菌色氨酸操纵子：加入色氨酸——阻遏色氨酸操纵子—相关合成酶基因关闭。 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 Trp体系参与生物合成而不是降解; Trp合成分5步,有7个基因参与. 组成包括:阻遏基因（R）、启动区(P)、操纵区（O）、前导区（L）、弱化区（a）和结构基因区； Trp操纵子的转录调控包括阻遏系统和弱化系统. 3、原核与真核基因表达调控的异同 4、DNA水平的表达调控 染色质的丢失：不可逆 核的全能性（totipotency）：细胞核内保存了个体发育所必需的全部基因 基因扩增(gene amplification)：增加基因的拷贝数 非洲爪蟾卵母细胞rRNA基因卵裂时，扩增2000倍，达1012个核糖体 药物：诱导抗药性基因的扩增；肿瘤细胞：原癌基因拷贝数异常增加 基因重排(gene rearrangement)：将一个基因从远离启动子的地方移到距它很近的位点从而启动转录。如免疫球蛋白基因重排 DNA甲基化(DNA methylation)： mCpG，即“CpG岛”：在DNA上成串出现，通常被甲基化，极易自发脱氨形成胸3腺嘧啶。 甲基化(methylated)程度高，基因表达降低； 去甲基化(undermethylated)：基因表达增加 DNA甲基化能引起染色体结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式改变——控制基因表达 染色质(chromatin)或染色体(chromosome)结构对基因表达的调控 （1）“开放”型活性染色质结构对转录的影响：转录发生前，染色质在特定区域被解旋松弛，使转录因子与启动区DNA结合——诱导转录。 （2）“灯刷型”染色体上的环形结构与基因的转录活性：两栖类动物卵细胞减数分裂时才能观察到——是最活跃的转录区结构。 DNA甲基化与X染色体失活 雌性胎生哺乳动物细胞中两条X染色体之一在发育早期随机失活 X染色体失活中心(X-chromosome inactivation center,Xic):Xist基因(Xi-specific transcript) 5、转录水平的表达调控 最重要、最经济的调控方式 顺式作用元件(cis-acting element) 反式作用因子(trans-acting factor) 转录起始的调控 顺式作用元件(cis-acting element) 影响自身基因表达活性的DNA序列 非编码序列 分启动子、增强子、沉默子 启动子 真核基因启动子：由核心启动子和上游启动子两部分组成，是基因转录起始位点（+1）及5’上游大约100-200bp以内的一组具有独特功能的DNA序列，是决定RNA聚合酶II转录起始点和转录频率的关键元件。 核心启动子：保证RNA聚合酶II转录正常起始所必需的最少的DNA序列。包括转录起始点和上游-25-30bp处的TATA盒。 上游启动子元件(upstream promotor elements,UPE)：-75bp处 CAAT 盒（CCAAT）和GC盒（GGGCGG）等，能通过TFIID复合物调节转录起始的频率。 增强子及其对转录的影响 增强子：能使与它连锁的基因转录频率明显增加的DNA序列。如SV40上游的两个72bp正相重复序列。 作为基因表达元件，增强子具有的特点： 见教材P257。 呈环状结构，其功能受DNA双螺旋空间构象的影响。 增强子的作用原理 1影响模板附近的DNA双螺旋结构，导致DNA双螺旋结构弯折，活化基因转录； 2将模板固定在细胞核内特定位置，有利于DNA拓扑异构酶改变DNA双螺旋结构的张力，促进RNA聚合酶II在DNA链上的结合和滑动。 3增