遗传标记和遗传图谱构建.pdf

1 1 997年第3期 作物品种资源 29 遗传标记和遗传图谱构建 ．型 垫 (中国农业科学院作物品种资 研究所，北京 100081) 摘要 遗传标记是遗传物质的特殊的易于识别的表现形式，它包括形态标记、细胞学标 记、生化标记和分子标记。遗传图谱构建是遗传标记最主要的用途之一，但是由于高等动植物 基因组的高度复杂性和有性世代太长以及遗传标记有限，在分子标记应用以前始终进展缓慢。 目前各主要作物的 RFLP遗传图谱构建已基表完成，并揭示出禾表科植物基因组的保守性， 发现 了禾本科不同作物的部分同源关系 相对而言，小麦族的RFLP遗传图谱构建进展较慢， 但1989年英、美、澳科学家联合倡导并制定小麦族 RFLP作图计划以来，至今已取得很大进 展。 关键词 遗传标记 遗传图谱 小麦族 RFLP 遗传标记是遗传物质的特殊的易于识别 的表现形式，可以用来研究基因遗传和变异 的规律。而基因组DNA的变异 (多态性)是 遗传多样性形成的分子基础，然而由于直接 检测多态性的方法上的限制，将 DNA多态 性用作遗传标记直到近几十年才成为可能。 遗传图谱的构建是遗传标记最主要的用 途之一。然而，在高等动、植物遗传图谱的构 建中却遇到了基因组高度复杂和有性世代太 长的困难 ，而最困难的问题还在于可供利用 的遗传标记数量十分有限。直到80年代以来， 由于各种分子标记的应用，使遗传图谱的构 建工作取得较大进展，特别是 自H．Donis， Keler等人在1 987年成功地构建了第一张人 的 RFI P图谱以来如雨后春笋般地在全世 界范围内蓬勃开展起来。 1 遗传标记 在遗传学的研究中所采用的遗传标记是 随着遗传学特别是基因概念的发展而发展 的。目前，遗传标记主要分4大类：即形态学 标记、细胞学标记、生化标记和分子标记。形 态学标记主要指可以观察到的一些性状 ，如 收稿 日期：1996 09 26 种皮颜色、抗病性反应、株高等；细胞学标 记主要包括核型分析、染色体分带和原位杂 交技术、利用非整体进行遗传操作进而基因 定位等；生化标记主要是同工酶及种子贮藏 蛋白，有时又称做蛋白质标记或当做一种分 子标记；分子标记主要指在 DNA水平上的 标记，本文将重点介绍几种分子标记。 1．1 RFLP标记 即限制性片段长度多态 性 (restriction fragment length polymor— phism)标记 (简称RFLP)。这是一种利用放 射性同位素或某些非放射物质标记探针与转 移于支持膜上的基因组总DNA(经限制性内 切酶消化)杂交，通过显示限制性酶切片段 的大小来检测不同遗传位点等位变异 (多态 性)的一种技术。用作RFLP的探针 (只有单 拷贝或少数拷贝的序列才能作探针 ，在杂交 显影后显示清晰可辨的带型)主要来源是随 机的基因组克隆 (RG克隆)和 cDNA克隆。 与传统的遗传标记相比，RFLP标记具 有下列优点：①无表型效应，RFLP标记的检 测不受环境 条件 和发育 阶段的影响；② RFLP标记在等位基因之间一般表现为共显 性，因此在配制组合时不受杂交方式的影响； ③在非等位基因之间不存在上位效应，因而 维普资讯 30 作物品种资源 1997年第3期 互不干扰；④RFLP标记源于基因组 DNA 的自身变异，在数量上几乎不受限制。这些优 点使得 RFLP标记特别适合于构建遗传图 谱。 、 1．2 RAPD标记 即随机扩增多态性 DNA (random amplified polymorphic DNA)标记 (简 称 RAPD)。在 PCR 技 术 基 础 上， Wiliams等 (1990)采用随机核苷酸序列为 引物扩增基因组 DNA的随机片段 ，获得了 一 种新的分子标记。实际上 RAPD是一种特 殊形式的 AFI P，它与一般 AFLP的最大区 别在于用于扩增多态性 DNA 引物不是专一 的而随机的。 与 RFLP标记相比，RAPD有如下3个 特点 (Wangh和Power 1 992)：①合成一套 引物，可用于不同生物基因组的分析，而不 像 RFLP探针有种族特异性 ；②大大减少了 多态性分析的预备性工作 ，如制备克隆、同 位素标记、Southern吸引、分子杂交等。但 RAPD也有不足的一面，如显性标记即每个 标记提供的信息量少 ，RAPD检测受反应条 件影响大，重复性和稳定性差等等。 1．3 AFLP标记 即扩增片段长度多态性 (amplified fragment length polymorphism) 标记 (简称 AFLP标记)。这是由Zabean等 人发明的一项技术，即利用 PCR检测 DNA 多态性的一种方法，其原理是选择性扩增基 因组 DNA酶切片段。可见 AFLP实际上是 RFLP与 P