2011—05植物组织培养(下)教案.docVIP

植物组织培养（下） 专题一、胚乳培养及应用 主要内容 一、引言 二、胚乳培养的历史 三、胚乳愈伤组织的建立（重点） 四、胚乳愈伤组织再生植株的途径 五、胚乳再生植株的染色体倍性变异 六、胚乳培养的应用 七、存在问题及研究热点 一、引言 (一) 胚乳简介 裸子植物胚乳：受精前形成，单倍体（雌配子体） 类型 被子植物胚乳 ：双受精的产物，天然的三倍体组织。 没有胚乳的种子：绝大多数双子叶植物的种子。豆科和葫芦科的种子，单子叶的慈姑和泽泻种子胚在发育过程中可把胚乳完全消耗掉（大豆、花生、蚕豆）。 有胚乳的种子：禾谷类、双子叶的椰子、蓖麻、咖啡、烟草、番茄、辣椒和柿等植物的种子。胚乳在成熟种子中依旧存在，并在其中贮存了大量的营养物质。在种子萌发期间，这些物质被消化并用于幼苗的早期生长。 (二) 胚乳的优点 胚乳是理想的实验材料和试验系统。 1.从胚乳培养获得再生植株，就有可能建立起三倍体新类型，或是藉以产生无籽果实，或是利用其营养体生长优势。 2. 对实验形态发生学，胚乳组织是一种极好的材料。 原因：它是一种均质的薄壁细胞组织，完全没有维管成分的分化。 3.胚乳是研究一些天然产物的生物合成和代谢的理想系统。 原因：自然条件下，胚乳细胞内储存着大量淀粉、蛋白质和脂类，以供胚发育和种子萌发之需。 二、胚乳培养的历史（4个事件） 1933年，Lampe和Mills就进行了胚乳培养的最初尝试。 1949年，LaRue首次报道了由玉米未成熟胚乳建立起能够不断生长的愈伤组织，但未分化器官。 1965年，Johri和Bhojwani在一种檀香科寄生植物柏形外果中，发现由培养的成熟胚乳直接分化出了三倍体茎芽，从而有力推动了胚乳培养研究的继续发展。 1973年，印度学者Srivastava首次由自养被子植物罗氏核实木的成熟胚乳培养中，获得了三倍体胚乳再生植株，并进行了移栽，只是成活与否未见报道。 已在48种植物中进行过胚乳培养研究；获得器官分化程度不等的愈伤组织但未再生完整植物的物种有25种；再生完整植物的物种有11种12例。 三、胚乳愈伤组织的建立 (一) 胚乳愈伤组织形成的过程 胚乳→培养基上→ 培养(时间各异)→体积增大→胚乳的表面细胞(如水稻)/内层细胞 (如苹果) 分裂形成原始细胞团→肉眼可见的愈伤组织。 (二) 胚乳愈伤组织的类型（颜色、质地） 白色致密型：多数植物 白色松散型：少数植物 枸杞 淡黄色松散型：少数植物 枸杞 绿色致密型 ：猕猴桃 (三) 影响胚乳愈伤组织形成的因素（重点） 1. 基因型 供体植株的基因型是胚乳培养的关键因素，不同基因型植株的胚乳对培养基的反应不同，愈伤组织诱导率、分化率、胚状体诱导率及植株诱导率都不同 。 结论：想通过胚乳培养获得理想的三倍体植株，必须对同一种植物的不同品种（基因型）进行大量实验。 2. 胚乳的发育时期 旺盛生长期→取材的最适合时期 旺盛生长期的胚乳特点：胚已分化完成，胚乳已形成细胞组织，且已充分生长，几乎达到成熟时的大小，外观为半透明的固体状，富有弹性。 3.胚因子 ① 处在旺盛生长期的未成熟胚乳，在诱导培养基上无须原位胚的参与。 ② 完全成熟的胚乳，特别是干种子中的胚乳，在诱导其脱分化形成愈伤组织之前，必须首先借助于原位胚的萌发使其活化。 ③ 接种时胚乳的生理状态介于旺盛生长期和成熟期之间：没有原位胚参与时能形成愈伤组织，有原位胚参与时则能显著提高愈伤组织的诱导率。 4. 培养基成分 ⑴ 基本培养基 植物胚乳培养所采用的基本培养基为MS、MT、B5和White。 ⑵ 植物激素 单子叶植物的胚乳培养→在培养基中补充一定浓度的2，4-D/也可用NAA和IAA→能有效地诱导愈伤组织。 双子叶胚乳的培养→培养基中添加一定浓度的细胞分裂素并配以适量的生长素→能有效地诱导愈伤组织的形成。 ⑶ 碳源 研究表明：在胚乳培养中蔗糖、葡萄糖、果糖效果最好；乳糖、阿拉伯糖、半乳糖和棉子糖有抑制作用；淀粉能维持胚乳的生长。 ⑷ 附加成分 研究表明：水解酪蛋白(CH)、酵母提取物(YE)、番茄汁、葡萄汁、青玉米汁及抗氧化物质(如聚乙烯吡咯烷酮等)等外源添加物的添加能促进胚乳培养。 5.培养条件(温度、光照、pH) 温度：低温(4～7℃)处理可使胚乳形成愈伤组织的频率有所提高。愈伤组织生长的最适温度为25℃。 光照：因物种而异。 玉米胚乳——暗培养；蓖麻胚乳——1500lx的连续光照；其他物种的胚乳培养——多数为10～12h/d光照。 pH：要求较高，不同植物适宜pH 不同。一般是在4.6-6.3