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凱氏定氮---消解
凯氏定氮---消解
2010.10
蛋白质
蛋白质是一切生命的物质基础,这不仅是因为蛋白质是构成机体组织器官的基本成分,更重要的是蛋白质本身不断地进行合成与分解。这种合成、分解的对立统一过程,推动生命活动,调节机体正常生理功能,保证机体的生长、发育、繁殖、遗传及修补损伤的组织。根据现代的生物学观点,蛋白质和核酸是生命的主要物质基础。
以下几种富含蛋白的物质
由此看来物质中蛋白质的含量指标就显得尤为重要。
下面介绍蛋白质的测定原理及其方法
凯氏定氮法
1.凯氏法测定试样中的含氮量:在催化剂作用下,用硫酸破坏有机物,使含氮物转化成硫酸铵。
2.消化液中加入强碱蒸馏使氨逸出,用硼酸吸收后,再用标准酸滴定,测出氮含量,将结果乘以换算系数6.25,计算出粗蛋白含量。
一、原 理
二、实验过程
消化、蒸馏、吸收、滴定 。
首先介绍消化部分
凯氏定氮法包括四个过程:
(一)反应过程
有机物中的氮在强热和CuSO4, K2SO4 , 浓H2SO4 作用下,消化生成(NH4)2SO4
NH2 CHCOOH+2 H2SO4= SO2 + H2O + 2CO2 + NH3
2NH3+H2SO4= (NH4)2SO4
(二)各种试剂的作用
硫酸:
1. 脱水。使有机物炭化,生成C,
2. 氧化。 H2SO4将C、 H氧化为CO2和H2O蒸汽逸出,本身还原为SO2,而pro则分解成氮,则与硫酸结合成硫酸铵,留在酸性溶液中
1. 消化:
NH2 CHCOOH+2 H2SO4= SO2 + H2O + 2CO2 + NH3
2NH3+H2SO4= (NH4)2SO4
提高温度。
1. 它与硫酸反应生成硫酸氢钾,一般纯硫酸加热沸点330℃,温度可达400℃,加速了整个反应过程。
2. 此外,也可以加入硫酸钠,氢化钾盐类。
理由:随着消化过程硫酸的不断地被分解,水分的逸出而使硫酸钾的浓度增大,沸点增加。加速了有机的分解。
3. 硫酸钾加入量不能太大,否则温度太高,生成的硫酸氢铵也会分解,放出氨而造成损失。
硫酸钾:
硫酸铜:
1.催化剂 加速反应
硫酸铜,氧化汞或硒粉作为催化剂以及加入少量过氧化氢作为氧化剂,次氯酸钾防止污染通常使用硫酸铜。
2.碱性反应指示剂
??? 有机物全部消化后,出现硫酸铜的兰绿色,可以作为指示剂。
2、常量、半微量或微量
根据试样的用量可分为常量、半微量、微量、超微量分析。
方法
试样质量
试样体积(ml)
常量分析
>0.1g
>10
半微量分析
0.01-0.1g
1-10
微量分析
0.1-10mg
0.01-1
超微量分析
<0.1mg
< 0.01
四、操作与注意事项
(一)操作
1.取样品
2.消解
操作步骤
1.称取经过前处理的0.2~2.00g固体试样,移入消化管中,加入0.2g CuSO4、K2SO4及20ml的浓H2SO4。
2.把装有消化管的试管架安放在消解仪上,扣好排气罩,进行各项设置。
3.连接好管路,打开冷凝水,启动废气处理系统,
4.完成以上工作后,在【运行】主窗口下,选择直线加热或曲线加热。
消化不易起泡的样品,可选择直线加热,预加温度设为380℃,消化2h即可。
若易起泡的样品需采用曲线分段加热,可以如下加热模式
① 160℃~200℃ 区间内合适温度加热 20min
② 260℃~300℃ 区间内合适温度加热 25min
③ 380℃~390℃ 区间内合适温度加热 90min
因样品性质差异,参数应做相应调整。
5.升起消煮试管架,消化管冷却至室温。
6.样品冷却后,打开上盖体,取下试管架,取出被测样品进行下一步测试。
(二)注意事项
1. 取样量 :取样量的多少主要取决于试样的类型及待测元素含量的高低。为了减小称量时的误差,试样或基准物质的质量必须在0.2g以上。
2. 不要将样品粘在瓶颈上,炭化粘在壁上消化不彻底.消化过程中要逐渐升温,当低温加温至出现带有硫酸的白色气体后,才可升温使溶液沸腾,但避免剧烈沸腾。
3.当氢氧化钠足量时有黑色氧化铜生成而使溶液呈淡黑色;当氢氧化钠量不足时就无黑色氧化铜产生而使溶液呈淡蓝色,加入的氢氧化钠必须过量,并且动作还要迅速,以防止氨的流失。
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