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- 2017-08-22 发布于江苏
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八分子生物学技术
;基因重组:不同的DNA分子间发生共价连接形成重组DNA 分子。
基因重组涉及到的概念:
载体
外源DNA
工具酶
宿主
转化
;基因重组技术的过程
分 切 接 转
;
分(离目的基因)
切(割目的基因和载体)
接(连目的基因和载体)
转(化宿主细胞)
筛(选阳性克隆)
表(达目的基因)
;分子水平上的操作
细胞水平上的表达 ;目的基因;理想载体的基本条件:;质粒
噬菌体
腺病毒载体
逆转录病毒载体
……;2 载体DNA的选择; 存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子(ccc分子);具有自我复制功能。
带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物。
经改造后具有多克隆位点。
举例:质粒;;;抗Amp;多种酶切口;; ? 噬菌体包装范围:36.8kb~51.5kb(75%-105%);使用λ噬菌体???体的特点:
1、克隆的DNA有大小限制。
2、和外源DNA连接后,都要经过体外包装过程,把重组的DNA包进头部,和尾部装配成有感染性的噬菌体。
3、如果没有外源DNA插入,载体本身的DNA太小是不能被包装的
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