高效液相色谱仪的原理及应用知识讲述.pptVIP

高效液相色谱仪的原理及应用 2017-4-11 一、高效液相色谱法的定义和分类 流动相是液体的色谱称为液相色谱（LC）。 在液相色谱中，采用颗粒十分细的高效固定相，并采用高压泵输送流动相，全部工作通过仪器完成，这种色谱称为高效液相色谱（HPLC） 。 第一节 高效液相色谱法原理 2017-4-11 一、高效液相色谱法的定义和分类 液相色谱：平板色谱和柱色谱。 液相色谱：分配色谱、液固色谱、离子交换色谱、尺寸排阻色谱。 气相色谱：挥发性物质，不能用于热不稳定物质分析。 液相色谱：可分析各种物质，热不稳定物质，但流动相有毒，运行操作比GC难。能用GC就用GC。 2017-4-11 二、液相色谱中常用术语和参数 只针对HPLC特有的，其余术语与第三章同。 粒间体积（V0）：色谱柱填充剂颗粒间隙中流动相所占有的体积。 孔体积（Vp） ：色谱柱中多孔填充剂的所有孔洞中流动相所占有的体积。 2017-4-11 二、液相色谱中常用术语和参数 柱外体积（Vext）：从进样系统到检测器之间色谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。 液体总体积（Vtot） ：粒间体积、孔体积和柱外体积之和。 淋洗体积（V） ：从进样开始计算的通过色谱柱的实际淋洗体积。 2017-4-11 三、反相高效液相色谱 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今液相色谱的最主要分离模式。 溶质在填料表面的烃类和流动相之间进行分配。 溶质在吸附于填料表面烃类上的“改良固定相”和流动相之间进行分配 溶质被吸附于填料表面烃类分子上，类似吸附色谱。 2017-4-11 四、正相高效液相色谱 是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地随溶剂的介电常数增加而增大，洗脱能力越弱，溶质在柱上保留时间越长。 2017-4-11 第二节 高效液相色谱仪的组成 Agilent 1100 2017-4-11 1.输液系统 2.进样系统 3.分离系统 4.检测系统 5.数据处理 系统 一 高效液相色谱仪系统 高压泵 流动相溶剂 废液 色谱柱 进样口 检测器 2017-4-11 1、输液系统 贮液装置 脱气装置 高压输液泵 梯度淋洗系统 输液系统的功能: 1.提供足够的驱动力使流动相通过填充柱 2.使流动相流量精确和稳定 3.使流动相组成精确 2017-4-11 分析用高效液相色谱的流动相贮罐，常用1L的锥形瓶加一个电磁搅拌器，在连接到泵入口处的管线上要加一个过滤器。 (1) 贮液装置 2017-4-11 (2) 脱气装置 用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。 脱气机、超声脱气、真空脱气等。 2017-4-11 (3) 高压输液泵 主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。μL/min~几千mL/min 应具有压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 2017-4-11 (4) 梯度淋洗装置 2017-4-11 等度洗脱 2017-4-11 分析时间长 分离度差 MeOH / H2O = 6 / 4 MeOH / H2O = 8 / 2 等度洗脱 怎样解决呢？ 2017-4-11 梯度洗脱 2017-4-11 95% 30% MeOH 梯度洗脱 优点：可提高分离度、缩短分离时间、 降低最小检测量和提高分离精度。 2017-4-11 流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置： 2、进样系统 2017-4-11 高效分离柱 直型不锈钢管，内径1～8 mm，柱长5～40 cm。 3、分离系统 2017-4-11 色谱柱 填料 C18色谱柱 十八烷基硅基化学键合 到多孔硅胶或陶瓷微粒 SIL 多孔硅胶微粒 ZORBAX Eclipse XDB-C8 辛基硅烷化学键合到