6第三章细菌的生长和遗传变异1汇编.pptVIP

第三章 细菌的生长和遗传变异 主要内容 3-1 细菌的生长及特性 3-2 细菌的遗传与变异 一、生长与繁殖的概念 二、细菌生长的测定方法 三、细菌的生长特性 四、微生物膜的生长特性 3-1-1 生长与繁殖 同化作用大于异化作用时，细胞质的量增加，表现在细胞体积或重量的不断增加，这种现象称生长。 生长一定程度后细胞分裂，这就是繁殖。 个体的生长和繁殖体现为群体的生长。（微生物重量或数目的增加）。 群体生长＝个体生长＋个体繁殖 在微生物学中“只有群体的重复”才有意义，因此“生长”一般指群体生长。 3-1-2 细菌的生长测定方法 计数法 直接计数法——借助显微镜 间接计数法——平板计数 生长量测定法 测定重量、体积、含氮量来反映细菌的生长 （一） 计数法 1、直接计数法（显微镜） ①涂片染色法：一定量样品涂布在载玻片上，染色后计数。 ②滤膜染色法：一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。 ③比例计数法——将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。 ①涂片染色法 1视野菌液(ml)＝(0.1ml ／1cm2)*视野面积(cm2) 计数器(血球计数板）测定法 数了80个小格中有120个细菌，样品中的细菌浓度是多少？ (120个÷80)×400 / 1×10-4 ml =600×104个/ml 适用范围：测定个体较大的细菌或原生动物 细菌个体若太小、过多，由于每一小格中细菌层层叠加，相互遮挡，难以准确计数。 数数细菌（或其他微生物或细胞）数目，（一般数16×5=80个小格），折算样品细菌浓度； ②滤膜染色法 一定量样品过滤到滤膜上，然后染色计数。 需要知道滤液的体积和滤膜的面积。 在显微镜下计数，方法相同。 ③比例计数法 比例——样品菌液与等体积（或成一定比例）的血液混合，观测二者比例 如果平均每个视野中细菌数量/红血球的数量比例为5.5：1，则细菌数量=？ 5.5×400万个/m l =2.2×107个/mL样品 红血球数已知(男性400~500万个／mL，女性350~450万个／mL)，平均400万个/mL 比例计数法——将已知颗粒浓度的液体与待测菌液按一定比例混合后在显微镜下，测各自的数目。（特点：不要求记体积） DAPI:46-diamidino-2-phenylindole,dihydrochloride 4,6-二脒基-2苯基吲哚 Measurement of total cell counts 全细胞染色法（死活不分）：DAPI染色，DTAF DAPI:无毒性荧光染料，能够与DAN双链强力结合并产生荧光。采用358nm紫外光照射能发射明亮的蓝色荧光。 5-DTAF : 5-(4,6-dichlorotriazinyl) aminofluorescein Measurement of total cell counts 全细胞染色法（死活不分）：DAPI染色，DTAF 有必要区分细菌的死活吗？ 饮用水中卫生细菌学标准是TBC100个/mL（平板计数的标准），如果我们采用染色显微镜检测技术对刚刚加氯消毒的饮用水进行检测，可能会发现细菌数量会远远超过100个/mL，是不是饮用水就是不合格的饮用水呢？ 美蓝染色法（酵母活细胞计数） 活菌直接计数（DVC，Direct Viable Counts） 吖啶橙（AO）染色直接计数 BacLight染色直接计数法 N.A.法 CTC染色直接计数 吖啶橙（AO）染色直接计数（AODC） 吖啶橙染色直接计数法（AODC）：水样采集后迅速加入甲醛固定，甲醛最终浓度2%；取10mL固定后水样加入0.5mL0.2%吖啶橙（Acridine Orange，Sigma公司）染色1~2min.；将染色水样经滤膜（孔径0.2μm，直径25mm，黑色聚碳酸脂滤膜，Nuclepore公司）过滤；过滤后将滤膜置于载玻片上，用落射荧光显微镜（日本Nikon，EF-D型）计数视野中发橙色或绿色荧光的菌体；显微镜光源为200W汞灯，激发光滤光片为450~490nm，光束分离滤光片510nm，阻挡滤光片520nm。 吖啶橙染色，在紫外显微镜下观察细胞的荧光 BacLight染色直接计数法(一种核酸探针 ) BacLight染色直接计数法：将试剂按照产品要求配制后，取2mL固定后水样加入60μL所配BacLight染色试剂，避光培养15~20分钟；然后按照AODC处理方法制片，观察计数视野中发红色或绿色荧光的菌体。所用滤光片波段同AODC相同。 镜检计数视野中发绿色荧光的菌体 为活菌。 N.A.法 向水样中加入0.002%萘啶酮酸（NA，Nalidixic Acid，Fluka公司）和0.02