氟硼二吡咯-叶酸光敏剂的制备及其体外光动力活性题库.docVIP

氟硼二吡咯-叶酸光敏剂的制备及其体外光动力活性研究 Mei-Rong Ke, Sin-Lui Yeung, Dennis K. P. Ng,,Wing-Ping Fong,and Pui-Chi Lo 香港中文大学，生命科学学院，化学系。 文摘：制备了两种共轭体系延长的氟硼二吡咯光敏剂并用各种光谱分析方法进行了表征。相比于人类乳腺癌MCF-7细胞，这些偶联物对高表达叶酸受体的人类鼻咽癌KB细胞展现出更高的光细胞毒性。含更短的寡甘醇链的偶联物（化合物11a），由于有更高的细胞吸收活性及稍低的聚合趋势，因此对这两种癌细胞株的光细胞毒性有特别大的区别，其对KB细胞的IC50值(0.06μM)比MCF-7低了43倍,而相比于另一个含更长链的同类物（化合物11b），IC50值只低了六倍。链的长度也会影响他们的亚细胞定位，化合物11a对KB细胞的内网显示高亲和力,化合物11 b则主要是定位于溶酶体上。 1.引言： 开发出新颖高效的光动力治疗光敏剂(PDT)1-4已成为学术界的研究热点，除了经典的四吡咯衍生物，如卟啉、卟吩、脱镁叶绿酸和酞菁，氟硼二吡咯（BODIPY）衍生物也有成为光敏剂的希望，这归因于它们可通过化学方法改变π骨架获得理想的光学及光物理性质，以及即使在水介质中也具有的相对高稳定性。然而这一领域的研究并没有被充分地发展起来。如最近的两篇评述文章所报道的，大部分的BODIPY光敏剂仅限于吸收带在近红外区的硫唑嘌呤-BODIPY，而那些非硫唑嘌呤类BODIPY则很少被研究，尽管它们在被适当修饰后吸收带也位于近红外区，并表现出优越的光动力活性，而且在内消旋位置也可以引入一个额外的功能基团。我们最近报道了一系列聚乙二醇联苯乙烯BODIPY衍生物，他们的细胞摄取、亚细胞定位和光细胞毒性受苯乙烯基取代基影响很大。其中含五个三乙二醇链的化合物对人类大肠癌HT29细胞显示出了最高的效力，其IC50仅为7nM。作为本研究的扩展,在此我们报告两个在内消旋位置与叶酸通过三唑环桥寡甘醇链接的类似物,包括他们的制备和体外光动力活性。我们也研究了链的长度对其性质的影响。 在高效光敏剂的开发方面，一个主要的挑战是提高选择性，以使它们可以优先定位在肿瘤部位并发挥功效。一个常见的策略是通过直接共轭结合目标配体,如单克隆抗体、蛋白质,多肽,类固醇和叶酸10-12。在这些药物靶向性载体中，叶酸特别引人注意，这是因为他们的低分子量、高稳定、高组织渗透性,和非致敏性，更重要的是，那些真核细胞生物合成核苷酸所需的基于蝶呤的维生素对叶酸受体有很高的亲和力，这在大多数上皮癌细胞中表现的非常明显，但在正常组织中并不如此。因此，作为一个提高药物肿瘤选择性的有效方法，叶酸作为各种成像和治疗药剂载体已被广泛研究。有潜在应用于PDT的叶酸共轭的许多光敏剂已见报道，包括卟啉、脱镁叶绿酸、卟吩、细菌叶绿素和包埋光敏剂的量子原子团以及纳米粒子。我们相信,通过叶酸-苯乙烯组联BODIPY，得到的偶联物能表现出更强的肿瘤选择性,从而有利于靶向PDT。 2.结果和讨论 2.1合成和表征 线路图1显示了这些偶联物的合成路线。首先用羟基BODIPY130与溴丙炔2或炔基甲苯磺酸盐3在K2CO3存在下于丙酮中反应得到相应的取代产物4a和4b。为了通过重原子效应促进系间窜越和单线态氧的生成，化合物4a和4b分别通过在乙醇中与碘和碘酸混合反应得到相应产物5a和5b。然后通过Knoevenagel缩合反应与对三乙二醇苯甲醛632反应得到联苯乙烯BODIPY化合物7a和7b。这一修饰可以延长它的π共轭体系使吸收带转移至红色,从而??利于光渗透到组织中。乙二醇链则用于提高此染料的亲水性、生物相容性和细胞摄取率。然后将叶酸8与2-【2-（2-叠氮乙氧）乙氧基】乙胺9在DCC和吡啶存在下于DMSO中反应得到同分异构体α-和γ-酰胺基的叠氮叶酸10，如高效液相色谱分析（图1）所示，这两个同分异构体的比例约为3:7，这是由于叶酸的γ-羧基的空间位阻较小，反应活性高因此以酰胺在γ位的产物（如线路图1中所示）为主，这与其他文献的报导相符。20,33,34这两种混合物未经分离，直接与炔 基联苯乙烯BODIPYs 7 a和7 b进行点击反应，分别得到化合物11a和11b。这两个化合物通过高效液相色谱纯化并用紫外-可见特征光谱和高分辨率电喷雾（ESI）质谱进行了表征。如图S1b和S1c所示，与10的信号相比，11a和11b信号的分辨率不高，尤其是11b。所有其他新化合物也都用各种光谱学分析方法和元素分析方法进行了充分的表征。 2.2.电子吸收及光物理性质 我们在DMF中测定了11a和11b的紫外可见光谱，两个光谱在662nm有一个强的Q带，并严格遵守朗伯-比尔定律，这表明这两种偶联物在DMF中的聚合效应并不明显。 在610