蛋白质工程选编.pptVIP

;想一想;一、蛋白质工程崛起的缘由;基因工程在原则上只能生产自然界已存 在的蛋白质，这些天然蛋白质是生物在 长期进化过程中形成的，它们的结构和 功能符合特定物种生存的需要，却不一 定完全符合人类生产和生活的需要。;;满足人类生产和生活的需要;例如．胰岛素改造 　 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已通过临床实验。 　;　　;;温故知新 蛋白质的结构及其多样性;;①氨基酸种类不同，肽链结构不同;蛋白质的功能;二、蛋白质工程的概念;二、蛋白质工程的基本原理; 蛋白质的功能是DNA决定的，那么要制 造出新的蛋白质，就要改造DNA，所以蛋白质工程的原理应该是中心法则的逆推。;联系旧知识：;天然的蛋白质合成过程按照中心法则进行：;2.原理：中心法则的逆推; 蛋白质工程的基本原理;蛋白质工程流程图;蛋白质工程的主要步骤通常包括： （1）从生物体中分离纯化目的蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维重组和三维晶体结构;;蛋白质结构测定 一级结构测定： 直接法：直接测定多肽链的氨基酸顺序。 间接法：从编码蛋白质的基因的核苷酸顺序来推导蛋白质的氨基酸顺序。 三级结构测定： X-射线晶体衍射——研究处在晶体状态下的蛋白质的空间结构 核磁共振(NMR)光谱——研究处在溶液状态的蛋白质的结构。 ; X-射线衍射技术： 用于蛋白质及核酸三维结构的确定，至今已有数百种蛋白质的结构被确定。; 蛋白质工程的主要手段 以重组DNA技术为核心的基因工程技术改造蛋白质。 位点特异性突变——基于结构生物学、信息生物学 基因突变 随机突变——基于高通量筛选法 基因内部的剪接 基因剪接 5‘或3’端的剪接 ;基因定点诱变技术的常用方法是PCR法。;;讨论;三、蛋白质工程的进展与前景;你知道酶工???吗？绝大多数酶都是蛋白质，酶工程与蛋白质工程有什么区别？ ; ;;;2）改变底物特异性 作为洗衣粉蛋白酶，其分解蛋白的种类无疑是多多益善，通过改变枯草芽胞杆菌蛋白酶两个特异性口袋S及S4，能够提高酶的底物特异性。 ;;; 酶的稳定性 1.酶稳定的分子原因 1）共价键： 肽键（peptide bond） ——稳定蛋白质和酶主链的核心力量。 二硫键（disulfide bond） ——由两个Cys的侧链-SH氧化而成，是某些蛋白质维持结构稳定性的主要因素。;2）非共价键： 疏水相互作用（hydrophobic interaction）: 是维持蛋白质分子稳定的主要的作用力。 氢键（hydrogen bond）： 是稳定蛋白质分子的空间结构，特别是二级结构的重要力量。;静电相互作用（electrostatic interaction）： 又称离子键、盐键、盐桥，是正负电荷间的作用力。对酶分子稳定性有关的盐键大部分形成于分子表面上。 范德华力： 在电中性分子之间的非共价结合。分子间形成的范德华力越大越稳定。 金属离子： Ca2+、Mg2+和Zn2+等高价阳离子与多肽链不稳定的弯曲部分结合，可显著增加酶分子的稳定性。;;;;;