流式细胞术在微生物学中的应用.ppt

流式细胞术在微生物学中的应用 FISH-FCM 方法检测酵母-细菌二元体系中微生物数量 微生物样品固定(E.COLI,酵母，两种二元体系） 荧光原位杂交（细菌通用探针EUB33，5’端用荧光染料Cy5修饰；酵母探针为PF2，5’端用荧光染料Cy3修饰） 流式细胞仪计数 微生物样品超声预处理研究 FISH-FCM同时检测不同浓度的细菌与酵母数量 Thanks for your attention! * 流式细胞术 在微生物学中的应用 彭公峰流式细胞术原理 FISH-FCM技术检测活性污泥中微生物群落结构 1.制备活性污泥悬浊液 2.制备菌悬液以及原位杂交 3.流式细胞仪的校正以及cell quest软件分析 5‘端经过羧基荧光素标记，适量的甲酰胺溶液，目的是为了增加探针杂交严格性，探针BET与GAM 之间只有一个碱基的差别 将阴性区域设定在Rejected region内，G1中的每一个小点均代表探针阳性细胞，利用CellQuest软件统计G1中的微生物数目 100～10 1区域为NON探针标记的阴性区域，FL1一H 值大于10 的区域为阳性区域 A.bacteria；B：Eucarya?；c：d-Proteobacteria；D：B Proteobacteria；E： Proteobacteria；F：Comamonas spp． I：Eucarya?；2：Proteobacteria；3：BProteobacteria； 4： Proteobacteria； 5：Comamonas spp． 类群相对含量（%）=特异性探针标记的细胞数目/探针 EUB标记的数目X100% 染色后的细菌或酵母都能够发出强烈荧光，并与荧光微球、噪音 明显分开。 FISH杂交后微生物散点图 图a为细菌单一体系的FI4—SSC散点图，图b为酵母单一体系 的FL2-SSC散点图，图c为二元体系的FL2一FIA双通道散点图 Measured concentration(cell／ml) Measured concentration(cell／ml) 单一体系和二元体系中酵母数量测定 单一体系和二元体系中细菌数量测定 *