微生物检测-第5章幻灯片.pptVIP

第二节 沙门菌检查法 美国细菌学家Salmon与Smith于1885年分离出猪霍乱沙门菌。1990年为纪念Salmon，定名这类细菌为沙门菌属。 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌。包括伤寒、副伤寒甲、乙、丙型，肠炎，鼠伤寒等沙门菌，现今已发现2324个血清型。 在世界各地的食物中毒中，沙门菌食物中毒常占首位或第二位。规定在药品和食品中不得检出沙门菌。美国每年报道病例45 000个左右，实际数量可能多达200-300万。伤寒每年400-500例。 一、生物学特性 1.形态 两端钝圆的革兰氏阴性杆菌，（0.4-0.9）μm ×(1-3)μm，无芽孢，周生鞭毛，一般无荚膜，少数有包膜。 光滑型的细菌大小均匀，粗糙型则大小不一，长短不一。 2. 培养特性 在营养琼脂平板上18-24h培养形成无色半透明，表面光滑、湿润、隆起的菌落，直径2-3mm。有些菌株在营养琼脂平板上生长不良，形成 “侏儒”菌落，加葡萄糖或甘油，生长良好，但易使菌株粗糙, 呈干燥、无光泽、边缘不整齐。 光滑型菌在肉汤中无菌膜、无沉淀；粗糙型则产生沉淀，上层液透明。 生长温度在10-42℃，最适38℃；pH4.5-9，最适pH6.8-7.8；需氧或兼性厌氧。 3. 生化特性 靛基质-，甲基红+，v-p -，柠檬酸盐反应d，产硫化氢，尿素酶反应-，还原硝酸盐， ?-葡萄糖醛酸苷酶d，不能发酵乳糖，可以被噬菌体裂解。 4. 抗原结构 （1）抗原构造 菌体抗原（o）：不被乙醇、0.1%石炭酸所破坏。与特异性抗血清呈颗粒状凝集，形成慢，不易摇散。现已知有50多种，多数沙门菌含有两种以上的O抗原，有的O抗原是一种菌独有的，有的是几种菌共有的，凡含有共同特异性抗原成分的血清型归为一个群，可将沙门菌化分为42群，按A-Z排列，Z以后的顺序以O51-O67表示。引起人类沙门菌病的95%以上都在A-F 6个群内。 表面抗原（K抗原）：沙门菌中有三种K抗原，即Vi抗原、M抗原和5抗原。 可阻止O抗原被抗O血清所凝集，具有O不凝集性。常用于菌型鉴定。 M抗原：粘液抗原，在菌型鉴定上无特殊意义。 5抗原： 鞭毛抗原（H抗原）：经乙醇或酸处理后失去与特异性抗体的结合力。制备时，应用具有丰满鞭毛的菌种18-24h的培养物，加甲醛固定或60℃以下加热后即成H抗原。H抗原与抗H血清56℃2h后，可出现疏松易于摇散的絮状凝集。 沙门菌的H抗原有两相，特异性高的称为第1相（特异相）抗原；特异性低的称为第2相（非特异相）抗原；多数沙门菌同一菌株，常可分离出两种H抗原的菌落，菌落的外观性状完全一样，但与相应抗体作凝集反应时则明显不同。具有两相抗原的称为双相菌，仅有一相抗原的则称为单相菌。 （2）抗原变异 Smooth-Transient-Rough变异：为避免R型的出现，保存培养基内不应含有糖类，不要多次移种传代。 V-W（Vi-O）变异：具有Vi抗原的菌株称为V型菌，失去Vi抗原的菌株称为W型菌。W型菌只能同其相应的O型血清发生凝集，而不与Vi血清凝集。 HO-O变异：有鞭毛抗原的HO型菌变为无鞭毛的O型菌。 位相变异：有双相鞭毛抗原的沙门菌两个相可以互变。通常在一个培养物内二相并存，在平板上各占半数，但挑取单菌落，经多次移接后，又出现两相各半现象，这种由一相变为另一相的变异，称为位相变异，单相菌不产生位相变异。 5、 发病机理和症状 菌量大 活菌和菌体内毒素协同作用 小肠和结肠里繁殖，侵入粘膜 ，由淋巴系统进入血液 潜伏期8-48h 急性期，每克粪便中沙门菌多至10亿个 食物中毒的特征性症状 腹泻 恶心 腹痛 低烧和寒颤 有时呕吐、头痛、倦怠 伤寒的典型症状 持续发热39-40℃ 昏睡症 剧烈腹痛（腹部痉挛） 头痛 食欲不振 出现扁平的玫瑰红色点状红疹 （一） 检验程序 1.预增菌: 将供试液接种在无选择性增菌培养基中培养，使受损伤的细菌得以修复，然后再转接至增菌培养基中。 一般在营养肉汤中。但美、英、日、欧均选用乳糖肉汤作预增菌液。以1：10的比例接种，18-24h,35-37℃。 预增菌培养基的选择 2.选择性增菌 取1mL预增菌液转种至增菌培养基10mL。37℃24h，培养基可采用亚硒酸盐胱氨酸肉汤培养基或四硫磺酸盐煌绿肉汤培养基，我国与英国相同采用后者。美、日采用二者联用有助于提高沙门菌的检出率。 3.分离培养 选择性培养基： DHL：无色半透明，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株粉红色、中心黑色 HE：蓝绿或蓝色，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株黄色、中心黑色 SS：无色半透明，产硫化氢的菌落中心黑色或全黑，乳糖阳性菌株粉红色、中心黑色 分离沙门菌应以出现单个菌落为准，否则应重新分离。 由于平板用前未烘干，或因分离不良菌落连片均须重新分离。