第一章第2、3、4节.ppt

第二节 DNA的体外重组;外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用。 一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素： (1) 实验步骤要尽可能地简单易行， (2) 连接形成的“接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段， (3) 对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。? ;A同种内切酶生产的粘性末端的连接;B同尾酶生产的粘性末端的连接;C不同粘性末端的连接;D人工粘性末端的连接 5‘突出末端;D人工粘性末端的连接 3‘突出末端;D人工粘性末端的连接 平头末端;E粘性末端的更换;F重组率;提高重组率的方法;提高重组率的方法;二 用于基因转移的受体菌或细胞; 一、宿主的选择 从安全性考试，应具备以下条件： 1. 不适合在人体内生存 2. 不适合在非培养条件下生存 3. 在非培养条件下，其DNA容易解体 4. 它的DNA不易转移 5. 它的质粒只在这一宿主由复制 6. 便于检测 ; 从遗传性考虑： 1.重组缺陷型recA－，用于基因扩增或高效表达的受体细胞（recA-） 2.限制系统的缺陷，或是修饰系统的缺陷。避免对外源DNA的除解。外切酶和内切