植物无病毒苗的培育解决方案.ppt

1.意义：采用生物、物理、化学等途径防治病毒病收效甚微，甚至毫无成效。通过组织培养的方法可以脱除严重患病毒植物的病毒种类，提高产量、质量。用组织培养方法生产无毒苗，是一个积极有效的途径，由于排除了使用药剂，所以对减少污染，防止公害，保护环境都有积极的意义。 　 当植物组织处于高于正常温度的环境（35-40℃）时，组织内部的病毒部分或全部钝化，但寄主植物的组织很少或不会受到伤害。 　 适用于离体材料（如接穗）和休眠器官的处理。如：在50 ℃左右的温水中浸渍10min至数小时，使病毒失活。　　　　　 　(2)变温处理：如马铃薯每天40 ℃处理4h，可清除芽眼中马铃薯的卷叶片病毒，而且保持芽眼的活力。　　 缺陷：不能脱除所有病毒。例如在马铃薯中只能消除卷叶病毒。 　注：热处理需与其它方法配合应用 (1).染病植株体内病毒的分布不均匀，越靠近茎顶的感染深度越低，生长点（约0.1－1.0mm）几乎不含或含病毒很少。原因可能是： a、分生组织中不存在无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，速度慢，不及细胞不断分裂和生长的速度。因此可利用微茎尖培养脱毒。 2.茎尖培养方法 (1)、材料选择、消毒： 在植株上直接取或在室内培养一段时间的植株上取顶芽或侧芽（3-5mm），然后消毒（或不消毒）。 （2）、微茎尖的剥取： 解剖镜下剥取。注意勿损伤生长点。 ②茎尖培养方法 （3）、接种：随剥随接，尽快接种。 （4）、培养：25℃左右，每天以16h、1500－5000lx光照下培养。保证较高温度和充足光照时间。　 （5）、继代、生根培养：同器官培养。 （1）常用培养基： MS　 White、Morel （2）提高钾盐的含量会有利于茎尖生长。在用MS培养基时，其中有些离子的浓度过高应适当稀释。 （3）严格控制糖浓度，一般2-4%，蔗糖、葡萄糖较好。 （4） 适当提高生长素（0.1－0.5mg/L）与细胞分裂素浓度。有时可加活性炭。用NAA或IBA，Kt或BA， 不用2,4－D。 GA适当。 注意： 一般用琼脂培养基。对于在固体培养 基上易形成愈伤组织的须用滤纸桥。 1、愈伤组织培养脱毒 原理： （1）愈伤组织分化植株，40%单细胞含有病毒，病毒的复制赶不上细胞的增殖速度 （2）有些细胞经过突变获得了抗病毒性。 缺陷： 后代变异的几率大；有的愈伤组织不能分化成苗。 木本植物茎尖培养难以生根成植株，将实生苗砧木在人工培养基上种植培养，再从成年无病树枝上切取微茎尖 (0.3-1.0mm)，在砧木上进行微体嫁接，以获得无病毒植株。果树上应用多。 许多化学药品（包括嘌呤、嘧啶类似物、氨基酸、抗菌素等）处理植物，进行抑制病毒的增殖或使之不活化，整株植物用化学疗法不能除去病毒，但离体培养和原质体培养效果明显。 五　病毒植物的鉴定 一、指示植物法 (一)指示植物的确定　　　　 ▼ (二）草本指示植物鉴定方法　▼ （三）木本指示植物鉴定方法 ▼ 利用病毒在其他植物上产生枯斑作为鉴别病毒种类的方法。 专门用以产生局部病斑的寄主植物即为指示植物，又称寄主植物。它只能鉴定靠汁液传染的病毒。 应根据不同的病毒选择适合的指示植物。并且一年四季都可栽培。 (二）草本指示植物鉴定方法 1.汁液涂沫法 ▼ 2.小叶嫁接法 ▼ (三）木本指示植物鉴定方法 嫁接鉴定法，常用劈接。 ①采取汁液　在被鉴定植物上取1－3g幼叶，在研钵中加入10ml水及少量磷酸缓冲液（PH7.0），研碎后用双层纱布过滤，再在汁液中加入少量的500－600目金钢砂（摩擦剂）。 ②接种　用棉球蘸取汁液在指示植物叶面上轻轻涂沬2－3次，后用清水冲洗叶面。 ③培养　在防蚜虫温室内培养，15－25C，2－6天观察病症。 四、酶联免疫鉴定法 六　无病毒苗的保存和利用 一、无病毒苗的保存繁殖 1.通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目（网眼为0.4－0.5mm）的网纱，防止蚜虫进入。栽培用的土壤也要进行消毒。 2.通过离体培养进行繁殖和保存。 二、无病毒苗的利用 在生产中防止病毒再感染，一旦感染 要重新采用无病毒苗，以保证质量。 复习思考题： 4.如何鉴定茎尖培养而成的脱毒苗确实无毒？ 5.如何理解枯斑法鉴定植物是否脱毒的作法? 6.怎样保存和利用无毒苗？ 3培养基与培养方式 三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 （1）.外植体大小： 通常以带1-3个幼叶原基的茎尖（约0.3-0.5mm)作外植体为宜。不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。 三、脱毒机理及方法-茎尖培养脱毒 4.影响微茎尖培养的因素 （2）.培养条件：增加光照 （3）.外植体的生理状态 茎尖最好在活跃生长的芽上切取，