圆二色谱CD原理.pptVIP

光学活性分子对左、右圆偏光的吸收率的差值 由于感光作用都是E 引起的，因而，将E 作为光矢量。 振动面：E 与光传播方向组成的平面。 （1）高亮度的点光源；?（2）日光色。色温接近6000K；（3）在可见光区连续光谱；（4）高显色性，显色指数＞95；（5）在整个寿命期内维持光色特性；（6）高电弧稳定性；（7）热重启能力；（8）启动后即能达到接近最大光输出；（9）电弧光斑小、易聚光。 自然光 平面偏振光 双折射现象： 一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。 尼科耳棱镜。 3、平面偏振光（Plane polarized light） 也称线（完全）偏振光，简称偏振光。 它的振动面称为其偏振面。 振动方向保持不变 振幅发生周期性变化 E之端点在空间的轨迹为一平面正弦曲线 投影到垂直于光传播方向的平面上为一直线段 4、布儒斯特角 当入射光射到两种介质界面上时，反射光和折射光的偏振情况与入射光不同。 5、四分之一波片 圆双折射：某个物质对于左、右圆偏光的折射率分别为nL和nR， 若 nL = nR，则为光学各向同性物质； 若 nL ≠ nR，则为光学各向异性物质；左、右圆偏光的相位改变， 若nL＞nR，透射光的偏振面右旋。 若nL＜nR，透射光的偏振面左旋。 8、光的吸收和圆二色性（circular dichroism, CD） 化合物在正常情况下，处于低能的基态，电子占据所有的成键轨道（σ、π、n轨道）。如果电子吸收了外界的能量，它就从基态跃迁到激发态能级。 如果所有的跃迁仅在基态的最低振动能级和第一激发态之间，吸收光谱将是很狭窄而不连续的谱线。 由于分子的价电子跃迁总伴随着振动和转动能级的跃迁，所以，紫外分光光度计测定物质的吸收光谱，虽然有一最大吸收峰值，但都是具有一定波长宽度并相对平滑的曲线。 圆二色性的存在将通过该物质传播的左、右圆偏光变成椭圆偏振光。并且只在发生吸收的波长处才能观察到。 9、ORD与CD光谱 同时产生， 包括同样的分子结构信息：光学活性物质分子中的不对称生色团。 CD反映光与分子间能量的交换，旋光性则是与分子中电子的运动有关。 可以由Kronig-Krammers转换方程相互转换。 CD谱的极值处与吸收峰一致（科顿效应，cotton effect），因而分子中不同生色团对于谱的贡献比在ORD中更容易分辨。 ORD是渐近线，两端不回归 蛋白质的光学活性 1、氨基酸的圆二色性 可见光区：各种氨基酸都没有光吸收。 紫外光区：只有芳香族色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有吸收。 氨基酸分子内的紫外生色基团：吲哚基、酚羟基、苯基、二硫键、咪唑基和羧基等。 2、肽的圆二色谱 活性肽构象与其生理功能的关系 肽的构象也是蛋白质构象的一种模型。 肽的圆二色性为研究肽在溶液中的构象提供了重要信息。 苯丙氨酸（ phenylalanine， Phe）：255、261和268nm附近； 酪氨酸（ tyrosine， Tyr） ：277nm左右； 色氨酸（ tryptophan， Trp） ： 279、284和291nm附近； 二硫键的变化反映在整个近紫外区。 Far UV CD spectra of poly-L-Lys 3、估算蛋白质二级结构含量 6、磁圆二色谱（ Magnetic Circular Dichroism ，MCD） 磁性材料对左、右圆偏光的吸收不同而产生的二色性现象。 利用法拉第效应，在外加磁场的作用下，许多原来没有光学活性的物质也具有了光学活性，原来可测得CD谱的，在磁场中CD信号可增大几个数量级。 7000 Gauss 标准操作时谱带宽度选为1nm； 高分辨率测量用较窄的狭缝宽度，此时PMT电压较高，信噪比差； 当样品的光密度很高、CD很小时，就要保持测试CD峰多需要的足够浓度，并用较宽的狭缝宽度。此时，由于样品OD值过高，可能存在有荧光或杂散光引起的某些假象。 Number of data point data pitch, i.e. number of data points per nm, will not directly influence the noise level. However if post run further data processing will be applied to reduce the noise, it’s advisable to collect as many data points as possible to increase the efficiency of the post run