課题血红蛋白的提取和分离.pptVIP

课题3 血红蛋白的提取和分离 （一）样品处理 1、红细胞的洗涤： 目的是 。要加入 防止血液凝固；离心将血液分层，用胶头吸管吸出 ；用 洗涤，重复三次直至上清液不再呈现黄色。 （一）样品处理 1、红细胞的洗涤： * 专题5 DNA和蛋白质技术 一、基础知识： （一）凝胶色谱法（分配色谱法） 一些微小的多孔球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛） 凝胶 原理 一、基础知识： （一）凝胶色谱法（分配色谱法） 一些微小的多孔球体（内含许多贯穿的通道，由多糖类构成如葡聚糖、琼脂糖，具多孔的凝胶就叫分子筛） 凝胶 原理 当不同的蛋白质通过凝胶时，（ ）的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程（ ），移动速度（ ），而（ ）的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在（ ）移动，路程（ ），移动速度（ ），相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 相对分子质量较小 较长 较慢 相对分子质量较大 凝胶外部 较短 较快 （二）缓冲溶液 能够抵制（ ）对溶液的（ ）的影响，维持PH基本不变。 外界的酸或碱 pH值 许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有( )，在( )下，这些基团会带上（ ） 。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其（ ） 移动。电泳利用了待分离样品中各种分子（ ）以及分子本身（ ）、（ ）的不同，使带电分子产生不同的（ ），从而实现样品中各种分子的分离。 可解离的基团 正电或负电 所带电荷相反的电极 带电性质的差异 大小 形状 迁移速度 一定的pH （三）电泳 原理： 思考：人们用鸡的红细胞提取DNA，用人 的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？ 样品处理—粗分离—纯化—纯度鉴定 蛋白质的提取和分离一般分为四步： 二 实验操作 血红蛋白 每条肽链环绕一个亚铁血红素基团，可携带一分子氧或一分子二氧化碳。血红蛋白因含血红素而呈现红色。 去除杂蛋白 柠檬酸钠 黄色血浆 生理盐水 2、血红蛋白的释放： 在 和 作用下，红细胞破裂释放。 蒸馏水 甲苯 3、分离血红蛋白溶液： 离心分层；滤纸过滤去除 ；分液漏斗分出 。 4、透析： 脂溶性沉淀层 红色透明液体 装入透析袋并置于磷酸缓冲液中（pH为7.0）透析。 （二）凝胶色谱操作