中国生物工程杂志2008H3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究_曹婧中国生物工程杂志2008组胺H3受体激活剂高通量筛选细胞模型的研究_曹婧.pdfVIP

中国生物工程杂志 China B io techno logy, 2008, 28( 9): 61~ 67 技术与方法 组胺 H3受体激活剂高通量筛选细胞 模型的研究* 1, 2** 3 1, 2 1, 2 1, 2 曹 婧 张 烨 彭志刚 李际仙 王少鹏 ( 1 中国科学院北京基因组研究所 北京 101300 2 中国科学院研究生院 北京 100039) ( 3 上海华大天源生物科技有限公司 上海 201203) 摘要 目的: 建立基于报告基因的组胺 H 3受体 ( H 3R )激活剂的高通量筛选模型, 用此模型对收 集到的中草药化合物组分进行筛选, 以发现新的组胺 H 3R 激活剂。方法 将 H 3R 基因质粒 ( H 3R / pCDNA3. 1-hygro)与报告基因质粒 ( 3XCRE-LUC )按 31的比例共转染入 H EK293细胞, 建立了稳 定的 H 3R 配体的报告基因筛选细胞株。激活剂与细胞表面 H 3R 结合后, 激活相应的信号通路, 调节 Forsko lin刺激后的报告基因的表达, 通过测定荧光素酶报告基因表达水平的变化, 评估激活 剂影响 H 3受体的生物活性。结果 通过对筛选条件, 如激活剂孵育时间、Forsko lin终浓度、化合物 溶剂的选择、溶剂 DM SO 终浓度等的优化, 建立了可靠的筛选方法。该模型的 Z因子可达到 05 以上, 稳定性可保持 20代, 完全符合高通量筛选需求。利用该细胞模型对多种中草药萃取物进行 了筛选, 找到了两种对 H 3R有活性的中药组分。结论 建立的细胞模型可以有效的应用于以组胺 H 3受体为靶点的高通量药物筛选。 关键词 组胺 H 3受体 (H 3R) 报告基因 Forsko lin 高通量筛选 中图分类号 R965. 1 随着组合化学、微芯片技术和基因组学的发展, 高 而 H2受体则主要控制 胃酸的 分泌, 其拮抗 剂也 成为 通量筛选 技术 ( high throughput screening, HTS) 应运 而 主要的治疗胃肠溃疡的药物 [ 7] 。随着人类基因组计划 生 [1] 。HTS就是利用药靶的分子或细胞水平的生物学 的完成, 组胺受体家族两个新成员 H 3和 H 4受体分别 [ 8] 机制, 以微孔板为基 础, 进行大量 筛选, 找到 能选择 性 于 1999年和 2001年被发现 。他们所偶联的 G 蛋白 都是 G i。H3受体集中表达 在神经元细 胞中; H 4受体 地作用于药靶的有生物活性的化合物 [ 2] 。