抗癌药物筛选模型与筛选方研究_王兴旺抗癌药物筛选模型与筛选方法的研究_王兴旺.pdf

综述与专论 　　△本课题得到“八·五”国家科技攻关专题基金和本所 新药研究国家重点实验室基金资助 抗癌药物筛选模型与筛选方法的研究△ 王兴旺　胥　彬 (中国科学院上海药物研究所, 上海 200031) 摘要　主要介绍用于抗癌药物筛选的人癌裸鼠移植模型和人癌小鼠肾包膜下移植模型; 对细胞毒 活性的 4 种体外检测方法进行了比较; 还对分化诱导剂、拓扑异构酶抑制剂、抗微管药和生物反应 调节剂的筛选方法进行了评述。 关键词　抗癌药物　筛选模型　筛选方法 　　寻找选择性高的抗癌药物是当前制药工 业的重要研究课题, 应提高新药筛选质量,增 加筛选工作的可靠性和预见性, 减少筛选结 果的假阴性和假阳性,创制出有代表性的各 类肿瘤的筛选模型和筛选方法。近年来, 我国 在此方面的研究已取得不少进展。现结合本 实验室的工作作一介绍。 1　抗癌药物筛选模型的研究 动物移植性肿瘤仍是目前筛选实验中最 常用的模型。其主要优点是:接种适量瘤细胞 后不久即产生肿瘤, 移植成活率高, 生长均 匀,易于客观地判断疗效,实验周期较短等。 但其主要缺点是实验结果常与临床反应不一 致。此外,用动物移植性肿瘤发现的抗癌药主 要对恶性淋巴瘤和白血病有效, 而对常见的 实体瘤如肺癌、肝癌、胃癌及食道癌等往往疗 效不佳。因此动物移植性肿瘤模型有其可用 性,也有其局限性,也说明建立人肿瘤细胞株 及人癌异种移植模型至关重要。近几年, 我国 从国外引进并自建了不少人肿瘤细胞株, 自 建的瘤株包括耐维 A 酸的人白血病细胞株 ( HL-60-RAR) 、人结肠癌耐药株 ( HCT, V2000) 和人口腔癌耐药株( KB, V2000) 等。 在人体肿瘤异种移植方面, 主要开展了人癌 裸鼠移植模型和人癌小鼠肾包膜下( SRC) 移 植模型的研究。 1. 1　人癌裸鼠移植模型 裸鼠因胸腺依赖性免疫功能缺陷, 异种 移植时无明显排斥反应, 可进行人癌移植, 并 可保持人癌原有的组织形态和生物学特性以 及对抗癌药的原有敏感性。可见,人癌裸鼠移 植模型的建立,开辟了直接针对人癌进行化 疗研究的新途径。我所是目前国内拥有人癌 裸小鼠移植模型最多的单位,已成功地将人 结肠癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、胃癌、 肾癌、宫颈癌、肝癌、淋巴瘤和白血病等移植 于裸小鼠,晚近又首建了儿童视网膜细胞瘤 ( Rb-C) 和人恶性纤维组织细胞瘤裸鼠移植 模型,并进行了抗癌药筛选研究 [ 1] 。只是裸鼠 饲养困难,价格昂贵, 国内现有条件下尚难用 于常规筛药。 1. 2　人癌小鼠 SRC 移植模型 本室研究表明, 人癌移植于免疫功能正 常的小鼠 SRC 部位后,在较短时间内能逃避 机体的免疫排斥反应, 并可增加肿瘤浸润和 转移的机会;而且 SRC 部位的肿瘤血供较丰 富, 化疗的敏感性高;实验周期短; 每次实验 动物较少,可使成本大大降低;因而具有很大 的实用价值。具体做法是:小鼠 ip 水合氯醛 麻醉, 5 m in 后常规消毒背部皮肤,手术暴露 右侧肾脏, 用套管针将 2 mm 左右的新鲜癌 ·39·　中国医药工业杂志　Chin ese Journal of Pharmaceu tical s 1997, 28( 1) 组织移植至 SRC 部位, 在装有 100 格( 10 格 = 1 mm) 显微标尺的体视显微镜下测量移植 块的最大直径( L )和最小直径(W ) ,复原肾脏 并缝合伤口。移植后第 7 d 处死小鼠,取出持 瘤肾脏, 在体视显微镜下测量移植块 L 和 W , 求出平均直径和理论瘤重( 1/ 2LW 2 ) , 并 计算抑瘤率。本室将人体肺腺癌移植至正常 ICR 小鼠 SRC 部位, 移植后 5～8 d 内,肿瘤 直径能持续生长(在这段时间,肿瘤直径约增 加 1 倍)。几种抗肿瘤药物对该模型均呈现抑 制作用, 抑瘤率都在 60%以上( 表 1) , 提示在 一时缺少大量裸鼠的情况下, 可用免疫功能 正常的小鼠代替裸鼠进行抗癌药物的筛 选 [ 2] 。 表 1　一些药物对正常小鼠肾包膜下人肺腺 癌移植瘤生长的影响 组　别 剂　量 ( mg /k g/ 肿瘤平 均直径 理论瘤重 肿瘤抑制率 d×d , ip) ( mm±SD) ( mg) ( % ) 对照 3. 2±0. 3 16. 4 5-氟尿嘧啶 37. 5×5 1. 1±0. 5* * 0. 7 96 长春新碱 0. 3×5 1. 9±0. 8* 3. 4 79 对照 4. 0±0. 6 32. 0 丙双吗啉 100. 0×5 2. 8±0. 4* 11. 0 66 　　n= 6, * P 0. 01, * * P 0. 001, 理论瘤重= 1/ 2×最大 直径×最小直径2 　　但上述方法只能接种实体瘤块,体外培 养的肿瘤细胞一