枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴验方案枯草芽孢杆菌分离及筛选鉴定实验方案.pdf

???? 枯草芽孢杆菌的鉴定实验 1.?形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等） ⑴单个菌体的形态 ⑵群体形态的观察 2.?革兰氏染色 3.?芽孢染色 4.?菌体大小测量 5．枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定：? 一 过氧化氢酶测定 ? 1、原理：过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和氧 ? 2、试剂： 3— 10%过氧化氢 培养基：肉汤琼脂培养基 ? 3、操作步骤：将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上， 30 培养 1— 2 天。取一干净载玻片，在 上面加一滴 3— 10%的过氧化氢，挑取一环培养 1— 2 天的菌苔，在过氧化氢 溶液中涂抹， 若有气泡（氧气）出现，记作过氧化氢酶阳性， 无气泡者为阴性。 也可将液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 ? 二 需氧性试验 ? 1、原理：不同种类的芽孢杆菌对氧气的需求性常有差异，因此本实验可作为鉴定芽孢杆菌 的一个较重要指标。 2、培养基：半固体培养基 ? 3、操作步骤：用一小环的肉汤菌液穿刺接种到上述培养基中（必须穿刺到管底），一般于 30 培养 3— 7 天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿着穿刺 线上生长者为厌氧菌或兼性厌氧菌 ? 三、乙酰甲基甲醇实验 1、?原理： 本实验是测定芽孢杆菌 （或其他细菌） 发酵葡萄糖的变化。 有些芽孢杆菌发酵葡萄糖 产酸，并将产生的酸进一步转化为中性化合物，如乙酰甲基甲醇或 2,3-丁二醇。乙酰 甲基甲醇在碱性环境中可被空气中的氧气氧化成二乙酰， 后者与蛋白胨中精氨酸所含 的胍基起作用，生成红色化合物，即表示 V.P.试验阳性。若在培养基中加入少量肌酸 以补充胍基，可加速反应。反应式如下： 2 丙酮酸—— 乙酰甲基甲醇 + 2 二氧化碳； -2H 乙酰甲基甲醇———— 二乙酰；