6章DNA的重組.pptVIP

6.1 DNA的重组 DNA分子内或分子间发生遗传信息的重新组合，称为遗传重组，或基因重排。重组产物称为重组体DNA (recombinant DNA)。 Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤 ①两个同源染色体DNA排列整齐 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 ③通过分支移动产生异源双链DNA ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为： * * 第6章 DNA的重组 主要内容 6.1 DNA的重组 重组意义： 能迅速增加群体的遗传多样性(diversity),使有利突变与不利突变分开，通过优化组合积累有意义的遗传信息。 它为DNA损伤或复制障碍提供了修复机制。 某些生物的基因表达受到DNA重组的调节。 同源重组(homologous recombination)，又称一般性重组 ，由2条同源区的DNA分子，通过配对、链断裂和再连接，而产生的片段间交换的过程。 以E.coli的同源重组为例，了解同源重组机制的Holliday模型。 6.1.1 Holliday 模型 内切酶 (recBCD) 交换 DNA 连接酶 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 分支迁移 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ Holliday中间体 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ DNA 连接酶 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ DNA 连接酶 内切酶 (recBCD) 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ (recA) Holliday中间体 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 3′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 3′ 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 3′ 内切酶 (ruvC) 内切酶 (ruvC) DNA 连接酶 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 3′ 片段重组体 DNA 连接酶 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 3′ 拼接重组体 片段重组体(patch recombinant) 拼接重组体(splice recombinant) 片段重组体 ： 切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。 拼接重组体： 切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA。 与DNA重组有关的酶 在大肠杆菌中，RecA蛋白参与重组最关键的步骤。 RecA有2个主要功能：诱发SOS反应和促进DNA单链同化。 DNA单链同化：指单链与同源双链分子发生链的交换，从而使重组过程中DNA配对、Holliday中间体的形成、分支移动等步骤得以产生。 RecBCD酶的作用 　　在重组中，RecA蛋白负责基本的碱基配对，但还需要另一些蛋白质来完成同源重组，其中最主要的是RecBCD酶。RecBCD酶具有三种活性： (1) 依赖ATP的外切核酸酶活性； (2) 可被ATP增强的内切核酸酶活性； (3) 依赖ATP的解螺旋酶活性。 RuvA和RuvB蛋白促进异源双链的形成。 RuvA可识别Holliday连接的结构； RuvB是一种ATPase，它可发动迁移反应。 RuvC内切酶可特异识别Holliday中间体并将其切开，解离重组中间体。 6.1.2 细菌的基因转移与重组 细菌的基因转移主要有4种机制： 接合(conjugation) 转化(transformation) 转导(transduction) 细胞融合(cell fusion) 进入受体细胞的外源基因通常有4种结果： 降解、暂时保留、与内源基因置换、整合 1. 接合作用 当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细菌细胞转移至另一细菌细胞的DNA转移称为接合作用(Conjugation)。 质粒 ：细菌染色体外的小型环状双链DNA，100kb 与转移有关的基因tra traA: 编码性菌毛单个亚基蛋白。性菌毛功能识别和联结阴性细菌。 traS 和traT：编码表面排斥蛋白，阻止同为F阳性细胞之间相互作用。 traD:编码TraD蛋白，可提供或成为DNA转移的通道。 traI:编码TraI蛋白,切口酶和解螺旋酶活性 接合质粒如 F 因子(F factor) 2. 转化作用 通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表