利用一步法RT-PCR检测柑橘裂皮病类病毒.PDFVIP

园 艺 学 报 2005, 32 ( 3): 408~ 413 A c ta H orticu lturae Sin ica 利用一步法 RT-PCR 检测柑橘裂皮病类病毒 唐科志 1 彭 军 2 王雪峰 1 周 彦 1 周常勇 1* 刘科宏 1 刘 英 1 杨方云 1 ( 1 中国 农业科学院柑橘研究所, 重庆 400712; 2 西南农业大学植物保护学院, 重庆 400716) 摘 要: 柑橘裂皮病 ( CEV d) 是限制柑橘产量的一种重要类病毒病害 , 国内外 已经建立了多种方法检 测该病 害的病原。本 研究初步建 立了快速 灵敏检测 CEV d的 一步法 RT-PCR 技术。经 过与生物 学鉴定和双 向聚丙烯酰胺凝胶电泳 ( sPAG E) 方法的比较检测, 表 明该 RT-PCR 方 法检测 周期短, 灵敏度 高, 有利于 对类病毒在春季和冬季 浓度低时进行快速准确的检测。应用该技术对大量田间寄主进行了检测。 关键词: 柑橘裂皮病; 一步法 RT-PCR; 生物检测; 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳 中图分类号: S 666; S 41 文献标识码: A 文章编号: 0513-353X ( 2005) 03-0408-06 Quick D etection of Citrus exocortis viroid ( CEVd) by One-step RT-PCR Tang Kezh i1, Peng Jun2, W ang Xuefeng1, Zhou Yan1, Zhou Changyong1* , L iu Kehong1, Liu Y ing1, and Y ang Fangyun1 ( 1C itru sR esearch Institute of Chinese A cademy of Ag riculture S ciences, Chongqing 400712, Ch ina; 2Co llege of P lant Protection, Southw est A gricultural U niversity, Chongq ing 400716, China ) Abstract: C itrus exocortis viroid ( CEVd) causes an important citrus d isease throughout the world. To date, variousm ethods have been deve loped for detecting this v iro id. One-step reverse transcription and po lym er- ase cha in reaction ( RT-PCR ) has been approached to detect CEVd. Compared w ith b io log ica l index ing and de- tection by sequential po lyacry lam ide gel electrophoresis ( sPAGE ), detection by One-step RT-PCR was more sensitive and quicker than that by o ther m ethods, overcom ing the detection difficu lty derived from low viro id concentrations in w inter and spring. Large num ber fie ld trees w ere detected by the One-step RT-PCR m ethod. K ey w ords: C itrus exocortis viroid; One-step RT-PCR; B io log ica l index ing; sPAGE 柑橘裂皮类病毒 ( C itrus exocortis viroid, CEV d) 是限制我国柑橘产量的一种重要的嫁接传播性类 病毒, 主要为害以枳、枳橙和蔾檬作砧木的柑橘品种,