纳米金标记抗体增强SPR检测大肠杆菌O157∶H7探究.pdf

V01．34 2013年6月 高等学校化学学报 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES No．6 1333—1338 doi：10．7503／cjc纳米金标记抗体增强SPR检测 大肠杆菌0157：H7 刘 霞1，李蓉卓1，李 蕾1，李文进1，周春娇2 (1．湖南农业大学食品科技学院，食品科学与生物技术湖南省重点实验室，2．理学院，长沙410128) 摘要将金纳米粒子(AuNPs)标记的大肠杆菌0157：H7(E．coli 0157：H7)的多克隆抗体(PAb)作为二抗， 采用氨基偶联法将PAb固定在传感器表面作为一抗，通过三明治方法用双通道表面等离子体子共振(SPR) 传感器对E coli 0157：H7进行检测，并与SPR直接法检测进行了比较．结果表明，直接法的检出限为 103 cfu／mL，线性范围为103～109 cfu／mL；AuNPs增强三明治法的检出限为10 cfu／mL，线性范围为10— 10”cfu／mL，灵敏度比直接法提高了100倍，且具有更宽的检测范围．本方法不仅检测时间短，而且具有良 好的选择性和重现性． 关键词金纳米粒子；大肠杆菌0157：H7；表面等离子体子共振；标记；检测 中图分类号0657 文献标志码A 大肠杆菌0157：H7(E．coli 0157：H7)是肠出血性大肠埃希氏杆菌的一个主要菌型?，受其污染 的牛肉、牛奶、鸡肉、蔬菜及果饮料等均可成为传播媒介．人感染E．coli 0157：H7后，轻者会出现短 暂腹泻、恶心及呕吐等症状，重者则导致剧烈腹痛、出血性结肠炎、溶血性贫血、血小板减少性紫癜和 溶血性尿毒综合症等怛J．因此，对E．coli 0157：H7进行快速、灵敏、实时检测具有重要的应用价值． 传统的微生物培养法旧’4j、生物发光法及细胞计数法等的检测时间长(一般为1—3 d)且灵敏度低，不 能完全满足E．coli 0157：H7的检测要求．近年来，分子生物学、免疫学及生物传感器等技术被用于 E．coli 0157：H7的检测与鉴定．巢强国等口。利用聚合酶链式反应(PCR)法检测食品中的E．coli 0157：H7，其检出限可达2．0 cfu／mL．Yu等№1通过时光分辨荧光免疫分析，采用三明治法检测了苹果 酒中的E．coli 0157：H7，将单克隆抗体连接在免疫磁珠上作为捕获抗体，以铕标记的同一抗体作为检 测抗体，可在6 h内检出10～100 cfu／mL的细菌．Li等o利用化学发光磁酶免疫法对E．coli 0157：H7 进行了检测，将兔抗E．coli 0157：H7修饰的磁性纳米颗粒充分结合E．coli 0157：H7后，与鼠抗 E．coli 0157：H7的单克隆抗体结合，然后采用碱性磷酸酶标记的马抗鼠IgG与上述复合物结合，再加 入碱性磷酸酶的特异性底物进行E．coli 0157：H7的检测，该方法检出限为103 cells／mL，完整的检测 时间约为3 h．Xu等旧1应用电化学传感器，分别采用羧基化多壁碳纳米管、戊二醛及3．氨基丙基三乙 氧基硅烷修饰的电极检测E．coli 0157：H7，结果显示戊二醛修饰的电极的电信号最强，在1．0x103～ 1．OxlO 7 cells／mL范围内呈线性关系，检出限为8．Oxl02 cells／mL． 免疫生物传感器是一种特异性强、快速且简便的检测技术，已广泛应用于微生物的检测．尤其是 表面等离子体子共振(SPR)∽1技术不同于其它传感技术，其具有无需标记、实时监测、操作简单及灵 敏度高等优点，已被广泛应用于多个研究领域¨¨13 J．目前，多数利用SPR生物传感器检测E．coli 0157：H7的研究是基于生物素一亲和素系统放大原理．王凯等¨4 o通过亲和素．生物素系统放大响应信 号，并引入复合抗体作为二抗，应用SPR传感器对E．coli 0157：H7进行检测，其检出限达到 105 cfufmL，并建立了细菌浓度与折射率对应的标准曲线，整个检测过程可在1 h内完成．Wang等¨5J 利用SPR建立消减抑制反应法检测E．coli 0157：H7，其检出限为3．Oxl04 cfu／mL．他们又引入生物凝 收稿日期：2013-02-04． 基金项目：国家自然科学基金(批准号和湖南省教育厅优秀青年项目(批准号：108050)资助． 联系人简介：刘霞，女，博士，副教授，主要从事食品分析与生物技术的研究．E-mail：liuxiaspr@smail．tom 万方数据 高等学校化学学报 V01．34 集素作为受体进行检测¨6|，检出限下降至3．Oxl03 cfu／mL． 金纳米粒子(AuNPs)因其折射率大、易于标记且用量少等优点成为增强SPR响应信号的有效方 法n7