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第五章 酶作用机理 一、酶的活性中心 必需基团(essential group) 酶分子中氨基酸残基侧链的化学基团中，一些与酶活性密切相关的化学基团。 常见的必需基团 Ser-OH His-咪唑基 Cys-SH Asp、Glu-COOH 酶的活性中心 或称活性部位(active site)，指必需基团在空间结构上彼此靠近，组成具有特定空间结构的区域，能与底物特异结合并将底物转化为产物。 活性中心内的必需基团 结合基团 催化基团 (catalytic group) (binding group) 催化底物转变成产物 与底物相结合 活性中心外的必需基团 :位于活性中心以外，维持酶活性中心应有的空间构象所必需。 1.酶的活性中心是酶分子中具有三维结构的很小区域 组成酶活性中心的必需基团在一级结构上可能相距很远，但在形成三级结构时相互接近，形成具有三维结构的区域，且多是酶分子中的裂隙或凹陷所形成的疏水口袋。 2 酶的活性中心对底物具有高度的特异性 酶活性中心与底物结合时，发生构象改变，相互诱导契合，增加与底物的互补性 3.大多数情况下底物与酶活性中心最初的结合是非共价性的 酶与底物结合的力 氢键 离子键 疏水键 van der Waals力 二、酶促反应的独特性质 1、酶反应分两类：仅仅是电子的转移，反应速率在108.S-1数量级；既有电子转移又有基团转移，反应速率在103.S-1数量级. 2.通过侧链基团和辅酶为媒介。 3.酶分子比底物分子大，这个巨大的酶分子对于稳定酶的活性部位是必要的。 4.酶催化的最适pH范围是比较小的。 5.除活性中心的基团外，酶的其它 特性对酶的催化作用也是重要的。 三、影响酶催化效率的有关因素 ——酶促反应的机理 1.邻近效应（approximation,proximity)和定向效应（orientation) 由于在酶的作用下，底物与底物分子的反应基团在空间上靠近，在方向上适合，使反应更易于进行 邻近效应、定向排列和表面效应有利于底物形成过渡态 邻近效应（proximity effect）和定向排列（orientation arrange）将分子间的反应变成类似分子内的反应，使反应速率显著提高。 趋近和定向效应 在酶反应体系中：底物与酶随机碰撞 趋近和定向效应 2.底物的形变（distortion)和诱导契合效应(induce fit) 底物在酶的作用下，构象发生改变，导致电子张力的产生，使得活化能降低，反应易于进行。 酶-底物相互作用在过渡态达到最优化 酶与底物结合时相互诱导发生构象改变 酶-底物复合物 酶与底物相互接近时，其结构相互诱导、相互变形和相互适应，进而相互结合。这一过程称为酶-底物结合的诱导契合假说 。 3.酸碱催化效应（acid-base catalysis) 酸碱催化是靠向反应底物瞬时提供质子或接受质子，使反应加速的一种作用机制。 在酶催化的反应中，不是由纯H+或OH-的数目决定的狭义酸碱催化，而是广义的酸碱催化，这种广义酸碱催化需要提供质子和接受质子的基团，在酶分子中存在着多种这样的基团。 广义酸碱催化与基团的解离常数有关 质子转移反应都包含广义酸-碱催化反应 酶是两性解离的蛋白质，酶活性中心上有些基团是质子供体（酸），有些是质子接受体（碱）。 这些基团在酶活性中心的准确定位有利于质子的转移，这种广义酸-碱催化（general acid-base catalysis）可以使反应速率提高102(105倍。 酶分子中具有酸-碱催化作用的基团 氨基酸残基 酸（质子供体） 碱（质子接受体） 谷氨酸、天冬氨酸 R(COOH R(COO( 赖氨酸、精氨酸 ? ? 半胱氨酸 R(SH R(S( 组氨酸 ? ? 丝氨酸 R(OH R(O( 酪氨酸 ? ? 组氨酸的咪唑基在酸碱催化中的作用和意义： 1. 解离常数6.0；在接近生物生理pH的条件下，既可以作为质子供体，也可以作为质子 受体; 2.给出质子和接受质子的速度较快。 酶能在近于中性的pH下进行催化, 提高酶反应速度 组氨酸在蛋白质中含量少, 但作用大. 4.共价催化（covalent catalysis) 酶分子中的亲核基团进攻底物中的亲电基团,形成