【摘要】【目的】对比两种不同路径灌注提取肝细胞的方法，改进小鼠肝.doc

小鼠肝细胞分离方法对比分析 陈睿 李德卫 谢言（400016 重庆 重庆医科大学附属第一医院肝胆外科） 摘要 目的:对比两种不同灌注途径提取肝细胞的方法 方法:IV型胶原酶分别从门静脉、下腔静脉对小鼠肝脏进行原位灌注，离体消化肝脏组织，离心法纯化小鼠肝细胞；胎盘蓝拒染试验检测肝细胞活性 结果：门静脉路径灌注所得的肝细胞细胞计数结果显示细胞活力能稳定地达到85%，平均活细胞总数为8.3*105每克体重；下腔静脉途径灌注所得肝细胞数量少且成团状、细胞计数结果显示细胞活力75%，平均活细胞总数为6*105每克体重。 结论:经门静脉途径灌注法优于下腔静脉途径灌注法 关键词：小鼠肝脏；门静脉；下腔静脉；肝细胞 Comparative analysis of mouse liver cell separation method Abstract Objective: To compare two different ways of extracting liver cell perfusion method Methods: IV collagenase separately from the portal vein, inferior vena cava on mouse liver was perfused in situ liver tissue, in vitro digestion, centrifugation purification of mouse liver cells; placental blue staining assay for the detection of liver cell activity Results: the portal vein perfusion paths from the liver cell count results showed that cell viability can be stably reached 85%, the average living cells total 8.3*105 per gram of body weight; inferior vena cava approach perfusion the liver cells of small amount and into ball shape, cell counting results showed cell viability in 75%, the average living cells total 6*105 per gram of body weight. Conclusion: through the portal vein perfusion method is superior to inferior vena cava approach perfusion method Key words: mouse liver; portal vein; vena cava; hepatic cells Corresponding author:Chen Rui;E-mail:candyjhon@126.com 体外分离和培养的肝细胞已被广泛应用于毒理学、 病毒学、 药理学以及其他相关领域的研究 ［1-3］,但由于原代肝细胞分离的条件苛刻，存活率低[4]，很多实验室都对此经行大量的研究，自Seglen提出Seglen肝脏原位两步灌流法[5]以来，大鼠肝细胞分离方法日趋成熟，但该方法主要应用于大鼠等中等大小的实验动物，尚未见用该方法对小鼠肝脏进行成功灌注，因此迫切需要建立一种有效的分离小鼠肝细胞的方法［6-7]。为此，我们对常规的胶原酶两步灌流法进行一系列优化和改进，通过对比两种不同灌注途径提取肝细胞的方法，寻找一种更稳定的能获得高活力原代小鼠肝细胞的分离和纯化方法。 1 材料和方法 1.1 动物和试剂 ①10只昆明小鼠，雌雄不限，体重25-30g，由重庆医科大学动物实验中心提供，实验动物许可证号：SCXK(渝)2007-0001，饲养条件：20~25 ℃，充足的水和食物，12 h昼夜交换。实验过程中对动物的处理符合医学伦理学标准。 --------------------------------------------------------- 试剂名称 公司 --------------------------------------------------------- 胶原酶Ⅳ 美国Sigma 公司 兔抗大鼠白