温度对酶活力的影响--最适温度的测定.docVIP

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2017-04-18 发布于江西
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温度对酶活力的影响--最适温度的测定.doc

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温度对酶活力的影响－－最适温度的测定一、实验目的掌握测量最适温度的基本原理和方法。二、实验原理温度对酶的影响具有双重作用。一方面，温度加速酶反应的速度；另一方面酶是蛋白质，温度升高会加速酶蛋白的变性。酶反应速度达到最大值时的温度称酶反应的最适温度。如果保持其它反应条件恒定，而在一系列变化的温度下测酶活力；以温度为横坐标，反应速度为纵坐标作图，可得到一条温度-酶活力曲线，可求得最适温度。温度是影响酶促反应速度的重要因素之一。在温度较低时，绝对温度对Vmax的影响遵守Arrnenius公式程式：三、实验材料 1.试剂 (1)酸性磷酸酯酶原酶液 (2)1.2mmol/Lnpp(用0.05mol/LPH5.0柠檬酸缓冲液配制) (3)0. 3mol/LNaOH溶液 2.仪器 (1)恒温水浴槽 (2)可见分光光度计 (3)试管刻度吸管四、方法步骤（分2大组）管号试剂1 23456780* 对硝基苯磷酸酯（mL）1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 不同温度预热2min的稀释酶液2.0ml10℃ 20℃ 30℃ 35℃ 40℃ 50℃ 60℃ 70℃ 50℃ 反应时间（min）15 0.3 mol/L NaOH（mL） 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 0*号管先加入1.0mL NPP，反应温度为50℃，然后加入0.3 mol/L NaOH 3.0 mL，最后加酶。五.实验结果 1.实验数据温度(℃)1020303540506070A405 1.4161.4051.7061.9261.1632.4920.9381.152.数据处理温度—酶活力曲线结果分析： 1）在PH值4.6的缓冲体系中，将反应置于不同的温度梯度中，测A405，做温度-吸光值的曲线图如上，其中40、60的数值偏差太大，所以作图时将其去掉 2）因为吸光值越大，说明对硝基酚的含量越高，即相同的时间内酶促反应快，及酶的活力高，因此由此表可以知道酸性磷酸酶在50度的时候酶的活力达到最大值，在10-50度间酶的活力随着温度的升高而增大，而以后随着温度的升高酶的活力下降。因此在PH值4.6的缓冲体系中，该酶的最适温度是50度，但是还要看此温度时酶的活力稳定性是否好，才能决定最适反应温度。